| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·猪α干扰素(pIFN-α) 简介 | 第8-9页 |
| ·猪α干扰素的生物学功能及特性 | 第8页 |
| ·猪α干扰素研究进展 | 第8-9页 |
| ·重组毕赤酵母表达外源蛋白过程简述 | 第9-12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统中的启动子（PAOX1、PGAP） | 第9-10页 |
| ·AOX1 启动子 | 第9页 |
| ·GAP 启动子 | 第9-10页 |
| ·P.pastoris 高密度生长与诱导策略 | 第10-12页 |
| ·P.pastoris 补料分批培养过程 | 第10页 |
| ·甲醇诱导阶段控制策略 | 第10页 |
| ·DO-Stat 控制策略简述 | 第10-11页 |
| ·μ-Stat 控制策略简述 | 第11页 |
| ·恒定甲醇浓度控制策略简述 | 第11页 |
| ·氧限制分批发酵控制(OLFB) 策略简述 | 第11-12页 |
| ·温度限制分批发酵控制(TLFB) 策略简述 | 第12页 |
| ·碳源混合流加诱导策略简述 | 第12页 |
| ·胞外蛋白降解与目的蛋白的稳定性 | 第12-13页 |
| ·物质代谢流分析(Metabolic Flux Analysis,MFA) | 第13页 |
| ·本文立题依据、研究目的以及前期研究工作简介 | 第13-14页 |
| ·主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-22页 |
| ·菌体 | 第15页 |
| ·10L 罐发酵所需培养基 | 第15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15-16页 |
| ·检测分析方法 | 第16-21页 |
| ·细胞浓度(OD600)、细胞干重(DCW)的的测定 | 第16页 |
| ·甲醇浓度在线和离线测定 | 第16-17页 |
| ·样品上清液中总蛋白浓度的测定 | 第17-18页 |
| ·猪IFN-α抗病毒活性的测定 | 第18-19页 |
| ·发酵上清液中胞外水解蛋白酶活性测定 | 第19-20页 |
| ·目的蛋白(pIFN-α)蛋白浓度SDS-PAGE 电泳分析 | 第20页 |
| ·山梨醇的检测方法 | 第20-21页 |
| ·发酵状态参数的测定 | 第21页 |
| ·发酵培养方法 | 第21-22页 |
| ·种子培养 | 第21页 |
| ·10 L 罐发酵培养 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-36页 |
| ·甲醇、山梨醇进入细胞的代谢途径示意图 | 第22-23页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导改善pIFN-α生产发酵过程 | 第23-29页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导对菌体生长、碳源利用及pIFN-α活性的影响 | 第24-26页 |
| ·甲醇浓度一定、不同山梨醇流加速度条件下菌体呼吸代谢特征 | 第26-27页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导降低胞外蛋白酶的积累和猪α干扰素的降解 | 第27-28页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导增强发酵过程对高甲醇浓度的抗冲击能力 | 第28-29页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导下，碳源代谢和NADH 再生利用的变化情况 | 第29-36页 |
| ·基于氧碳平衡的碳源代谢流分析 | 第29-33页 |
| ·甲醇/山梨醇共混诱导提高NADH 再生利用效率 | 第33-36页 |
| 主要结论与展望 | 第36-38页 |
| 主要结论 | 第36页 |
| 展望 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
