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桑细菌性枯萎病病原学及其致病机理研究

致谢第1-11页
摘要第11-13页
Abstract第13-16页
1 文献综述第16-42页
   ·桑树细菌性病害概况第16-20页
     ·桑细菌性疫病(Mulberry Bacterial Blight)第16-17页
     ·桑青枯病(Mulberry Bacterial Wilt)第17-18页
     ·桑枝软腐病(Mulberry Shoot Soft Rot)第18-19页
     ·桑叶日灼病(Mulberry Leaf Scorch)第19页
     ·桑细菌性叶斑病(Mulberry Bacterial Leaf Spot)第19页
     ·桑树植原体病害(Mulberry Mycoplasmas Disease)第19-20页
   ·肠杆菌与植物病害第20-33页
     ·肠杆菌科(Enterobacteriaceae)概况第20-22页
     ·肠杆菌属中的植物病原菌第22-24页
       ·生癌肠杆菌(E.cancerogenus)第22-23页
       ·阴沟肠杆菌(E.cloacae)第23-24页
       ·阴沟肠杆菌溶解肠杆菌亚种(E.cloacaesubsp.dissolvens)第24页
       ·超压肠杆菌(E.nimipressuralis)第24页
       ·梨形肠杆菌(E.pyrinus)第24页
     ·肠杆菌的分离鉴定第24-31页
       ·基本分离及鉴定方法第25-26页
       ·致病性测定第26-27页
       ·生理生化鉴定方法第27页
       ·分子生物学鉴定第27-31页
     ·肠杆菌的其他研究第31-33页
       ·植物生防菌第31页
       ·植物促生菌第31-32页
       ·生物降解菌第32页
       ·生物产氢菌第32-33页
       ·在食品生产中的潜在危害第33页
   ·植物来源肠杆菌的研究热点第33-36页
     ·肠杆菌作为生防菌和植物促生菌在作物中的定殖机制研究第33-34页
     ·生物标记在肠杆菌与植物互作研究中的作用第34-35页
     ·生物多样性和基因多态性的研究第35-36页
     ·肠杆菌新植物细菌病害的研究报道第36页
   ·新病害报道的程序与引起植物细菌病害的病原种类第36-40页
   ·本研究的背景及研究内容与目的第40-42页
     ·研究的背景第40-41页
     ·研究的内容与目的第41-42页
2 桑树细菌性枯萎病的病原学研究第42-72页
   ·材料和方法第43-51页
     ·病害调查、病原分离及致病性测定第43-45页
       ·田间症状与描述第43页
       ·病害样品的采集及其病原菌的分离纯化和保存第43页
       ·病原菌的致病性鉴定第43-45页
     ·病原菌的形态及基本生理生化特性第45-46页
       ·菌落及菌体形态观察第45页
       ·生理生化特性第45页
       ·碳源利用(Biolog法)第45-46页
     ·病原菌抗生素抗性鉴定第46页
       ·抗生素第46页
       ·不同浓度抗生素溶液制备第46页
       ·测试菌/培养基混液准备第46页
       ·纸片法对测试菌的抗生素敏感性测定第46页
     ·病原全细胞脂肪酸鉴定第46-48页
       ·试剂、仪器及分析软件第46-47页
       ·脂肪酸的提取过程:第47页
       ·脂肪酸的检测第47-48页
     ·病原菌16S rDNA及RNA聚合酶基因(rpoB)的序列测定第48-51页
       ·试剂和仪器第48页
       ·细菌DNA抽提第48-49页
       ·PCR扩增第49-51页
   ·结果与分析第51-65页
     ·桑树细菌性枯萎病病害症状描述第51-53页
       ·田间症状描述第51页
       ·接种症状描述第51-53页
       ·番茄组培苗致病性测定第53页
     ·桑树细菌枯萎病病原菌的特征第53-59页
       ·形态观察第53-54页
       ·生理生化和碳源(Biolog)利用特征第54-59页
     ·病原菌全细胞脂肪酸鉴定结果第59-61页
     ·病原菌两个基因序列的鉴定第61-65页
       ·16S rDNA序列分析第61-62页
       ·RNA聚合酶基因(rpoB)的序列鉴定第62-65页
     ·病原菌抗生素抗性鉴定第65页
   ·讨论第65-71页
     ·肠杆菌引起的桑树细菌性枯萎病的特点第66页
     ·引起桑"枯萎"病的病原菌—肠杆菌的特征第66-67页
     ·桑树"枯萎"病和桑树"青枯"病症状与病原的区别第67-69页
     ·肠杆菌引起植物细菌性病害的特征第69-70页
     ·植物致病肠杆菌的序列分析第70-71页
   ·本章小结第71-72页
3 利用gfp/lux双标记研究桑细菌性枯萎菌致病机理第72-91页
     ·材料与方法第72-78页
     ·强致病菌株的gfp/luxAB双基因标记第72-74页
       ·菌株、质粒及培养基第72-73页
       ·试剂及仪器第73页
       ·Enterobacter sp.R18-2感受态细胞的制备第73-74页
       ·质粒提取第74页
       ·Enterobacter sp.R18-2的电击转化第74页
       ·阳性转化子的荧光检测第74页
     ·GFP标记菌的PCR检测及序列测定第74-75页
       ·菌落PCR法对标记菌的GFP基因进行检测第74-75页
       ·标记菌的验证第75页
     ·标记菌的特性研究第75-76页
       ·菌落形态和菌体形态观察第75页
       ·流式细胞仪检测第75页
       ·GFP标记对菌株生长的影响第75-76页
       ·标记菌株R18-gfp-1中GFP表达稳定性第76页
       ·标记菌株R18-gfp-1的致病性第76页
     ·GFP标记菌在感病植株体内的定殖研究第76-78页
       ·原始菌和GFP标记菌在桑树体内的增殖第76-77页
       ·原始菌和GFP标记菌在番茄组培苗体内的增殖第77-78页
       ·GFP标记菌在番茄组培苗组织细胞寄生能力的观察第78页
   ·结果分析第78-88页
     ·桑树细菌性枯萎病病原菌的gfp/luxAB基因双标记第78-81页
       ·阳性转化子的荧光检测第79-80页
       ·阳性转化子的gfp-PCR鉴定第80页
       ·标记菌的16S rDNA基因部分序列分析第80-81页
     ·GFP标记菌的特性研究第81-83页
       ·菌落形态和菌体形态观察第81-82页
       ·GFP标记对菌株生长的影响第82-83页
       ·标记菌株R18-gfp-1中GFP表达稳定性第83页
       ·标记菌株R18-gfp-1的致病性鉴定第83页
     ·GFP标记菌在感病植株体内的定殖研究第83-88页
       ·病原菌在桑树体内的增殖第84-85页
       ·病原菌在番茄组培苗体内的增殖第85-86页
       ·GFP标记菌在桑树和番茄组培苗组织细胞寄生能力的观察第86-88页
   ·讨论第88-90页
     ·Enterobacter sp.R18-2 gfp/lux标记菌株的构建第89页
     ·Enterobacter sp.R18-2 gfp/lux标记菌株的致病力第89-90页
   ·本章小结第90-91页
4 桑树枯萎病病原菌的多态性研究第91-108页
   ·材料与方法第91-95页
     ·菌株的收集及保存第91-92页
     ·致病能力多态性分析第92-94页
       ·普通烟草过敏性反应鉴定第92-93页
       ·桑树致病能力测定第93页
       ·其它作物的致病性测定第93页
       ·生姜块茎和洋葱球茎致病性测定第93-94页
     ·脂肪酸多态性分析第94页
     ·PCR扩增和序列分析第94-95页
       ·基因组DNA的制备第94页
       ·PCR扩增体系第94-95页
       ·数据分析第95页
   ·结果分析第95-105页
     ·桑树枯萎病病原菌的过敏性反应测定第95-96页
     ·桑树枯萎病病原菌在桑树离体培养枝条上致病力的测定第96-98页
     ·桑树枯萎病病原菌脂肪酸多态性分析第98页
     ·桑枯萎病病原菌基因多态性分析第98-103页
     ·桑树枯萎病病原菌对其它作物致病力测定第103-105页
   ·讨论第105-106页
   ·本章小结第106-108页
5 结论与展望第108-110页
   ·结论第108页
   ·展望第108-110页
参考文献第110-121页
附录-1 作者简介及其博士期间论文发表情况第121-122页
 1 作者简介第121页
 2 博士期间论文发表情况第121-122页
附录-2 培养基和试剂配方第122-123页
附录-3 图片与表格第123-128页

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