| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1.前言 | 第9-22页 |
| ·肺炎链球菌 | 第9-13页 |
| ·肺炎链球菌概述 | 第9-10页 |
| ·肺炎链球菌致病机理 | 第10-11页 |
| ·肺炎链球菌抗药性研究进展 | 第11-13页 |
| ·HMG-CoA还原酶 | 第13-18页 |
| ·HMG-CoA还原酶作用机理 | 第13-15页 |
| ·甲羟戊酸途径 | 第15-16页 |
| ·HMG-CoA还原酶分类 | 第16-18页 |
| ·HMG-CoA还原酶抑制剂 | 第18-22页 |
| ·HMG-CoA还原酶抑制剂作用机理 | 第18页 |
| ·他汀类药物对两类HMGR的抑制作用比较 | 第18-20页 |
| ·他汀类药的临床应用 | 第20-22页 |
| 2.实验材料和方法 | 第22-31页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·化学试剂及抗菌素 | 第22页 |
| ·常用贮存液 | 第22页 |
| ·工具酶及分子量Marker | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·常用缓冲液 | 第23页 |
| ·Ni-NTA亲和层析用缓冲液 | 第23页 |
| ·ELISA、Western blot用缓冲液 | 第23-24页 |
| ·HMGR反应缓冲液 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·肺炎链球菌的培养及基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·肺炎链球菌HMGR基因引物的设计及PCR扩增 | 第25页 |
| ·质粒DNA的提取(碱裂解法小提质粒) | 第25页 |
| ·DNA限制性内切酶消化及DNA片段的回收与连接 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第26页 |
| ·原核细胞中重组质粒的筛选 | 第26页 |
| ·重组蛋白的原核表达及SDS-PAGE分析 | 第26-27页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第27页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质 | 第27页 |
| ·多克隆抗体的制备及效价测定 | 第27-28页 |
| ·Western blot分析 | 第28页 |
| ·肺炎链球菌HMGR活性检测方法 | 第28页 |
| ·肺炎链球菌HMGR同源模建分析及分子动力学优化 | 第28-30页 |
| ·HMGR竞争性抑制剂的筛选 | 第30-31页 |
| 3.结果与分析 | 第31-47页 |
| ·重组质粒pMD-hmgr的构建及鉴定 | 第31-34页 |
| ·基因组DNA的提取及HMGR基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·重组质粒pMD-hmgr的构建及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·HMGR基因的序列鉴定及分析 | 第32-34页 |
| ·重组表达质粒pET-hmgr的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒pET-hmgr的构建 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒pET-hmgr的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·HMGR的原核表达及分离纯化 | 第35-36页 |
| ·HMGR在大肠杆菌BL21中的表达 | 第35-36页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR的分离纯化 | 第36页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR免疫学分析 | 第36-37页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR活力测定及动力学研究 | 第37-42页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR活力测定 | 第37-39页 |
| ·佛伐他汀对肺炎链球菌HMGR活力的影响 | 第39-40页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR利用NADPH和NADH的比较 | 第40-41页 |
| ·重组肺炎链球菌HMGR动力学分析 | 第41-42页 |
| ·同源模建及分子动力学模拟 | 第42-45页 |
| ·竞争性抑制剂筛选 | 第45-47页 |
| 4.总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第53页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |