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APP apxIVA基因序列特性及rApxIVA/rTbpB亚单位复合菌苗对小鼠的免疫研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-13页
1 猪传染性胸膜肺炎病原综述第13-37页
   ·病原形态学及生化特性第13-14页
   ·病原细菌APP分类第14-17页
     ·生物型第14页
     ·血清型第14-15页
     ·APP基因型第15-17页
   ·血清型分布第17-18页
   ·病原主要毒力因子及其在致病机理中的作用第18-24页
     ·定殖因子第19-20页
     ·细菌防御进攻因子第20-24页
   ·病原重要毒力因子分子生物学特性第24-28页
     ·毒素分子生物学第24-26页
     ·APP转铁结合蛋白分子生物学第26-28页
   ·诊断方法第28-32页
     ·血清学诊断方法第28-32页
     ·分子生物学诊断第32页
   ·猪传染性胸膜肺炎的免疫预防第32-37页
     ·灭活疫苗第32-33页
     ·亚单位疫苗第33-34页
     ·弱毒疫苗第34-35页
     ·ghosts疫苗第35-36页
     ·疫苗免疫途径的研究第36-37页
2 APP apxIVA基因序列特性分析第37-73页
   ·研究目的和意义第37页
   ·研究内容第37-38页
   ·材料第38-40页
     ·菌株和载体第38页
     ·序列及分析软件第38页
     ·引物设计第38-39页
     ·主要试剂第39页
     ·主要仪器第39-40页
   ·方法第40-46页
     ·apxIVA基因序列结构特性分析第40页
     ·apxIVA基因序列在基因组外复制特性分析第40-46页
   ·结果第46-65页
     ·apxIVA基因结构特性第46-54页
     ·apxIVA基因片段在基因组外复制的特性第54-61页
     ·apxIVA基因重复序列在基因组外复制中的变异模式第61-65页
   ·讨论第65-72页
     ·关于研究中使用的载体和宿主菌第65-66页
     ·apxIVA基因中重复序列类型第66-67页
     ·apxIVA基因中的重复序列对分子生物学操作的影响第67-68页
     ·重复序列稳定性的研究方法第68页
     ·重复序列在基因组外复制过程中不稳定性的机制第68-70页
     ·apxIVA基因中重复序列的生物学意义第70-72页
   ·小结第72-73页
3 rApxIVA/rTbpB亚单位复合菌苗对小鼠的免疫研究第73-123页
   ·研究目的和意义第73页
   ·研究内容第73-74页
   ·材料第74-76页
     ·质粒与菌株第74页
     ·引物第74页
     ·抗体第74-75页
     ·试验动物第75页
     ·主要试剂第75页
     ·主要仪器第75-76页
   ·方法第76-87页
     ·鼠抗APP感染血清的制备第76页
     ·细菌培养第76-77页
     ·重组蛋白制备第77-78页
     ·检测抗原的制备第78-79页
     ·SDS-PAGE电泳和Western blot分析第79-81页
     ·APP荧光定量PCR检测方法的建立第81-82页
     ·疫苗制备及动物免疫第82-84页
     ·动物免疫第84页
     ·半数致死量(LD50)的测定第84页
     ·攻毒第84页
     ·血清特异性抗体监测第84-85页
     ·脾淋巴细胞转化试验第85-86页
     ·小鼠肺脏组织APP带菌量检测第86-87页
     ·小鼠肺脏病理变化第87页
     ·试验数据分析第87页
   ·结果第87-110页
     ·菌种鉴定结果第87-88页
     ·细菌浊度与活菌数的关系第88页
     ·LD50测定结果第88页
     ·重组蛋白表达结果第88-92页
     ·ELISA包被抗原纯化结果第92-93页
     ·APP实时荧光定量PCR检测方法建立结果第93-98页
     ·血清抗体监测结果第98-105页
     ·脾淋巴细胞增殖结果第105-106页
     ·攻毒后疫苗免疫保护力第106-107页
     ·攻毒小鼠病理变化第107-109页
     ·疫苗对肺脏APP的清除效果第109-110页
   ·讨论第110-122页
     ·试验所用菌种第110-111页
     ·试验设计思路第111-112页
     ·抗体监测指标的选择第112-113页
     ·重组蛋白的表达与分析第113-114页
     ·重组蛋白免疫前处理第114-115页
     ·检测抗原的纯化第115-116页
     ·关于抗体监测结果第116-118页
     ·关于脾细胞增殖试验第118页
     ·疫苗免疫对小鼠的保护作用第118-119页
     ·关于荧光定量PCR方法及检测结果第119-122页
   ·小结第122-123页
参考文献第123-135页
致谢第135-136页
附录第136-167页
 pET-32A-C(+)VECTORS载体示意图第136-138页
 研究中所用试剂及培养基第138-143页
 序列分析结果第143-151页
 测序报告第151-167页
论文发表第167页

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