| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| 1 家蚕滞育诱导的环境条件 | 第16-21页 |
| ·光周期 | 第16-18页 |
| ·温度 | 第18-21页 |
| 2 激素对滞育的调控作用 | 第21-26页 |
| ·滞育激素的分离及纯化 | 第22页 |
| ·家蚕滞育激素的结构及功能 | 第22-24页 |
| ·家蚕滞育激素的滞育诱导作用机制 | 第24-26页 |
| 3 家蚕滞育的解除 | 第26-37页 |
| ·滞育解除过程中的关键酶—山梨醇脱氢酶 | 第26-27页 |
| ·家蚕滞育生物钟蛋白质 TIME-EA4 | 第27-31页 |
| ·家蚕超氧化物歧化酶 SOD 与滞育终止的关系 | 第31-33页 |
| ·家蚕过氧化氢酶 CAT 可能参与生物钟调控 | 第33-37页 |
| 第二章 研究内容与基本实验方法 | 第37-45页 |
| 1 研究内容 | 第37页 |
| 2 常用材料与试剂 | 第37-40页 |
| ·菌种与蚕品种 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·缓冲液和常用溶液 | 第38-39页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第39-40页 |
| ·生物信息学资源及分析软件 | 第40页 |
| 3 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 4 基本实验方法 | 第41-45页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第41页 |
| ·RNA 反转录 | 第41-42页 |
| ·PCR 扩增反应程序及加样体系 | 第42页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第42-43页 |
| ·连接反应 | 第43页 |
| ·感受态细胞制备 | 第43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第43页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒 DNA | 第43-44页 |
| ·酶切反应 | 第44页 |
| ·利用 GeneRacerTM Kit(RLM-RACE)扩增 5'cDNA 末端 | 第44-45页 |
| 第三章 滞育诱导温度和光照节律对家蚕滞育代谢相关基因表达的影响 | 第45-62页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| ·供试家蚕品种 | 第45页 |
| ·亲代蚕卵处理方法 | 第45-46页 |
| ·胚后时期蚕体与组织的取样方法 | 第46页 |
| ·子代卵处理方法 | 第46-47页 |
| ·样品总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 链的合成 | 第47页 |
| ·家蚕 dh 和 sdh 基因的表达谱分析 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·家蚕滞育激素基因 dh | 第48-54页 |
| ·家蚕滞育代谢限速酶山梨醇脱氢酶基因 sdh | 第54-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| ·诱导子代滞育卵发生的温度与光照条件上调家蚕 dh 基因表达 | 第60页 |
| ·亲代高温环境下调家蚕整个世代 sdh 基因表达 | 第60-61页 |
| ·光照对该环境中的蚕卵和子代卵的 sdh 基因表达影响不同 | 第61页 |
| ·家蚕 5 龄幼虫期 dh 和 sdh 基因表达存在显著的组织和性别差异性 | 第61-62页 |
| 第四章 家蚕滞育生物钟蛋白基因 Bmea4 的表达特征及棉铃虫同源基因的克隆分析 | 第62-81页 |
| 1 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·供试家蚕及处理方法 | 第63页 |
| ·棉铃虫虫源及处理方法 | 第63页 |
| ·样品总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 链的合成 | 第63-64页 |
| ·家蚕 Bmea4 基因的时空表达谱分析 | 第64页 |
| ·家蚕 BmEA4 的 ATPase 活性测定 | 第64页 |
| ·棉铃虫 Haea4 基因的电子克隆 | 第64-65页 |
| ·Reverse Transcription-PCR 反应 | 第65页 |
| ·棉铃虫 Haea4 基因的 RACE 反应 | 第65页 |
| ·棉铃虫 Haea4 基因的组织表达分析 | 第65-66页 |
| ·生物信息学分析 | 第66页 |
| ·遗传距离和进化分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-78页 |
| ·家蚕滞育生物钟蛋白基因 Bmea4 的表达谱 | 第66-73页 |
| ·TIME-EA4 的同源基因克隆分析及组织表达 | 第73-75页 |
| ·棉铃虫 HaEA4 蛋白质二级结构比较 | 第75-76页 |
| ·棉铃虫 Haea4 基因及蛋白质的分子进化 | 第76-77页 |
| ·棉铃虫 Haea4 基因的组织表达分析 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-81页 |
| ·家蚕 Bmea4 基因是滞育的关键基因,但不是温度和光照授时因子的核心钟基因 | 第78-79页 |
| ·家蚕滞育卵活化启动过程不依赖 Bmea4 基因转录活性的上调 | 第79页 |
| ·家蚕 Bmea4 基因表达与自由基代谢密切关联 | 第79-80页 |
| ·棉铃虫的 HaEA4 蛋白质分子特性及 Haea4 基因表达与自由基代谢密切关联 | 第80-81页 |
| 第五章 滞育诱导温度和光照节律对家蚕 sod 基因和 cat 基因表达的影响 | 第81-97页 |
| 1 材料与方法 | 第81-82页 |
| ·供试家蚕品种 | 第81页 |
| ·亲代蚕卵处理方法 | 第81页 |
| ·胚后时期蚕体与组织的取样方法 | 第81页 |
| ·子代卵处理方法 | 第81页 |
| ·样品总 RNA 的提取及 cDNA 第 1 链的合成 | 第81-82页 |
| ·家蚕 sod 和 cat 基因的表达谱分析 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-94页 |
| ·滞育诱导温度和光照节律对家蚕超氧化物歧化酶基因 sod 表达的影响 | 第82-89页 |
| ·滞育诱导温度和光照节律对家蚕过氧化氢酶基因 cat 表达的影响 | 第89-94页 |
| 3 讨论 | 第94-97页 |
| ·亲代高温或黑暗条件上调家蚕 sod 基因表达 | 第94-95页 |
| ·高温光照对该环境中的蚕卵和子代卵的 sod 基因表达影响不同 | 第95-96页 |
| ·家蚕 5 龄幼虫期 cat 基因表达存在显著的性别及发育时空差异性 | 第96-97页 |
| 第六章 综合结论 | 第97-101页 |
| 1 家蚕滞育相关基因的表达存在显著的组织和性别差异性 | 第97-98页 |
| 2 诱导子代滞育卵发生的高温与光照条件上调家蚕 dh 基因表达 | 第98页 |
| 3 亲代卵高温环境催青能够下调家蚕整个世代 sdh 基因表达 | 第98页 |
| 4 光照对该环境中的蚕卵和子代卵的 sdh 基因表达影响不同 | 第98-99页 |
| 5 家蚕 TIME-EA4 的滞育生物钟活性不依赖基因表达水平的上调 | 第99页 |
| 6 棉铃虫 ea4 同源基因的克隆、分子进化及组织表达 | 第99-100页 |
| 7 滞育诱导温度和光照节律对家蚕抗氧化酶基因 sod 和过氧化氢酶基因cat表达谱的影响 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-114页 |
| 研究生期间发表文章 | 第114-115页 |
| 论文资助项目 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116-120页 |
| 附录一 文中所用缩略语一览表 | 第116-118页 |
| 附录二 氨基酸缩写一览表 | 第118-119页 |
| 附录三 Haea4 的 cDNA 序列及推导的氨基酸序列 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
