| 致谢 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-21页 |
| 第一章 昆虫抗菌肽研究进展 | 第21-42页 |
| 1 昆虫抗菌肽的分类 | 第21-27页 |
| ·天蚕素类 | 第21-23页 |
| ·防御素类 | 第23-25页 |
| ·富含脯氨酸的抗菌肽 | 第25-26页 |
| ·富含甘氨酸的抗菌肽 | 第26-27页 |
| 2 昆虫抗菌肽的生物活性 | 第27-30页 |
| ·抗细菌活性 | 第28页 |
| ·抗真菌活性 | 第28-29页 |
| ·抗肿瘤细胞能力 | 第29页 |
| ·抗原虫和病毒能力 | 第29-30页 |
| 3 昆虫杭菌肽的作用机制 | 第30-33页 |
| ·对细菌的作用 | 第32页 |
| ·对病毒的作用 | 第32页 |
| ·对肿瘤细胞的作用 | 第32-33页 |
| ·对原虫作用 | 第33页 |
| ·抗菌肽对真菌的作用 | 第33页 |
| 4 昆虫抗菌肽的应用 | 第33-37页 |
| ·农业领域 | 第34页 |
| ·医药领域 | 第34-36页 |
| ·食品化妆品领域 | 第36-37页 |
| 5 抗菌肽应用中亟待解决的问题 | 第37-39页 |
| ·提取纯化技术 | 第37页 |
| ·表达系统载体 | 第37-38页 |
| ·毒性 | 第38页 |
| ·稳定性和免疫反应 | 第38页 |
| ·抗菌活性 | 第38-39页 |
| 6 昆虫抗菌肽的表达策略 | 第39-42页 |
| 第二章 蝶蛹金小蜂CDNA文库抗菌肽基因的筛选 | 第42-65页 |
| 1 材料 | 第43-45页 |
| ·供试cDNA文库和菌种 | 第43-44页 |
| ·试剂及其他材料 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| ·cDNA文库的筛选 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的初步验证 | 第46-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-64页 |
| ·cDNA文库的筛选 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆的初步验证 | 第50-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 第三章 蝶蛹金小蜂抗菌肽基因阳性克隆抗菌活性的验证 | 第65-76页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·碱法抽提质粒所用的试剂 | 第65-66页 |
| ·其他试剂及材料 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-69页 |
| ·阳性克隆对大肠杆菌的抑制作用 | 第66页 |
| ·阳性克隆抗菌活性的稳定性 | 第66-68页 |
| ·阳性克隆的体外抑菌实验 | 第68-69页 |
| ·阳性克隆的序列分析 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-74页 |
| ·阳性克隆对大肠杆菌的抑制作用 | 第69-71页 |
| ·阳性克隆抗菌活性的稳定性 | 第71-73页 |
| ·阳性克隆的离体抑菌实验 | 第73-74页 |
| ·阳性克隆的序列分析 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 蝶蛹金小蜂抗菌肽的人工合成及活性检测 | 第76-95页 |
| 1 材料 | 第77-79页 |
| ·试剂 | 第77-78页 |
| ·仪器 | 第78页 |
| ·测试的微生物 | 第78页 |
| ·培养基 | 第78-79页 |
| 2 方法 | 第79-85页 |
| ·合成样品的确认 | 第79页 |
| ·抗菌肽的合成 | 第79-83页 |
| ·抗菌肽的纯化 | 第83页 |
| ·合成抗菌肽的活性测定 | 第83-85页 |
| ·盐离子浓度对合成抗菌肽活性的影响 | 第85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-93页 |
| ·合成样品的确认 | 第85-87页 |
| ·抗菌肽的合成及纯化 | 第87-89页 |
| ·合成抗菌肽活性测定 | 第89-90页 |
| ·合成抗菌肽的溶血活性测定 | 第90-92页 |
| ·盐离子浓度对合成抗菌肽活性的影响 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 第五章 蝶蛹金小蜂抗菌肽作用机制的初步研究 | 第95-100页 |
| 1 材料 | 第96页 |
| ·试剂及材料 | 第96页 |
| ·实验仪器 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-99页 |
| 4 讨论 | 第99-100页 |
| 第六章 蝶蛹金小蜂抗菌肽二级结构的预测及CD测定 | 第100-109页 |
| 1 材料 | 第101-102页 |
| ·试剂及材料 | 第101页 |
| ·实验仪器 | 第101-102页 |
| 2 方法 | 第102页 |
| ·二级结构的预测 | 第102页 |
| ·二级结构CD测定 | 第102页 |
| 3 结果和分析 | 第102-107页 |
| ·二级结构的预测 | 第102-104页 |
| ·二级结构CD测定 | 第104-107页 |
| 4 讨论 | 第107-109页 |
| 第七章 蝶蛹金小蜂抗菌肽PP30在原核细胞中的表达 | 第109-124页 |
| 1 材料 | 第109-113页 |
| ·菌种和载体 | 第109-110页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第110页 |
| ·其他试剂 | 第110-111页 |
| ·试剂的配置 | 第111-112页 |
| ·供试昆虫 | 第112-113页 |
| 2 方法 | 第113-119页 |
| ·PP30基因的克隆 | 第113-114页 |
| ·PP30重组表达载体的构建 | 第114-115页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第115-116页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第116-117页 |
| ·融合蛋白的Western印迹分析 | 第117页 |
| ·RNA抽提 | 第117-118页 |
| ·RT-PCR | 第118-119页 |
| 3 结果与分析 | 第119-122页 |
| ·PP30的PCR结果及酶切鉴定 | 第119页 |
| ·PP30重组表达载体的构建 | 第119-120页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第120-121页 |
| ·PP30表达产物的Western检测 | 第121-122页 |
| ·RT-PCR | 第122页 |
| 4 讨论 | 第122-124页 |
| 第八章 总讨论 | 第124-128页 |
| 1 本研究结果 | 第124-127页 |
| 2. 本研究的特色和创新点 | 第127页 |
| 3 不足之处及今后研究的方向 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-145页 |
| 附录:攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第145页 |