中文摘要 | 第4-5页 |
英文摘要 | 第5-12页 |
第一章 前言 | 第12-24页 |
1.1 死后组织器官的改变 | 第12-18页 |
1.1.1 死亡的定义 | 第12-13页 |
1.1.2 研究死后改变的意义 | 第13-14页 |
1.1.3 死后组织中的干细胞 | 第14-15页 |
1.1.4 死后组织表达谱的改变 | 第15-16页 |
1.1.5 眼组织的特殊性及死后改变 | 第16-18页 |
1.2 死亡间隔对供体角膜的影响 | 第18-21页 |
1.2.1 中国角膜移植供体紧缺 | 第18-19页 |
1.2.2 眼库对角膜移植供体的评估 | 第19-21页 |
1.3 细胞死亡方式 | 第21-24页 |
1.3.1 细胞死亡方式分类 | 第21页 |
1.3.2 程序性坏死的特点 | 第21-22页 |
1.3.3 程序性坏死的发生机制及其与凋亡的关系 | 第22-24页 |
第二章 实验材料 | 第24-30页 |
2.1 实验动物 | 第24页 |
2.2 抗体 | 第24页 |
2.3 引物 | 第24-25页 |
2.4 主要实验试剂和药品 | 第25-27页 |
2.5 主要实验仪器和耗材 | 第27-28页 |
2.6 主要实验溶液配置 | 第28-30页 |
2.6.1 1×PBS及10×PBS缓冲液的制备 | 第28页 |
2.6.2 LB固体培养基的配置 | 第28页 |
2.6.3 4%多聚甲醛溶液的配制 | 第28页 |
2.6.4 石蜡标本逐级脱水和水化溶液的配制 | 第28-29页 |
2.6.5 扫描电镜标本前期处理相关溶液的配置 | 第29页 |
2.6.6 角膜Whole-mount免疫荧光染色相关溶液的配制 | 第29页 |
2.6.7 依那西普注射液的配置 | 第29-30页 |
第三章 实验方法 | 第30-42页 |
3.1 动物模型的建立 | 第30页 |
3.1.1 小鼠死亡模型的建立 | 第30页 |
3.1.2 兔死亡模型的建立 | 第30页 |
3.2 房水细菌学培养 | 第30-31页 |
3.3 石蜡标本与石蜡切片的制备 | 第31-32页 |
3.3.1 石蜡标本的制备 | 第31-32页 |
3.3.2 石蜡切片的制备 | 第32页 |
3.4 石蜡切片HE染色 | 第32-33页 |
3.5 扫描电镜标本的前期准备 | 第33-34页 |
3.6 全角膜免疫荧光染色 | 第34-35页 |
3.7 实时荧光定量PCR | 第35-37页 |
3.7.1 Trizol法提取兔角膜内皮总RNA | 第35-36页 |
3.7.2 反转录PCR (RT-PCR) | 第36-37页 |
3.7.3 实时荧光定量PCR | 第37页 |
3.7.4 数据分析 | 第37页 |
3.8 全角膜LIVE/DEAD染色 | 第37-38页 |
3.9 全角膜TUNEL染色 | 第38-39页 |
3.10 转录组测序方法及结果分析 | 第39-41页 |
3.10.1 Illumina转录组测序简明实验流程 | 第39-40页 |
3.10.2 转录组测序结果分析 | 第40-41页 |
3.11 统计学分析 | 第41-42页 |
第四章 结果 | 第42-54页 |
4.1 不同死亡间隔和环境温度下眼前节大体和组织学改变 | 第42-44页 |
4.2 不同死亡间隔和环境温度下角膜内皮形态和功能的改变 | 第44-46页 |
4.3 机体死后角膜内皮细胞死亡方式的探究 | 第46-49页 |
4.4 机体死后角膜内皮基因表达谱的改变 | 第49-53页 |
4.4.1 死后12h兔角膜内皮差异表达基因分析 | 第49-50页 |
4.4.2 死后12h兔角膜内皮差异表达基因功能显著性富集分析 | 第50-53页 |
4.5 注射抗TNF-α抗体改善机体死后角膜内皮损伤 | 第53-54页 |
第五章 讨论 | 第54-58页 |
5.1 不同死亡间隔和环境温度下角膜内皮形态和功能的改变 | 第54-55页 |
5.2 机体死后低温环境下角膜内皮发育相关基因的表达变化 | 第55-56页 |
5.3 机体死后角膜内皮细胞的死亡方式 | 第56页 |
5.4 机体死后角膜内皮损伤的重要机制——TNF-α信号通路 | 第56-58页 |
第六章 结论 | 第58-59页 |
附录 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-71页 |
致谢 | 第71页 |