| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第15-22页 |
| 第1章 引言 | 第22-36页 |
| 1.1 PARP 和 PARP 抑制剂 | 第22-26页 |
| 1.1.1 PARP及其功能 | 第22-24页 |
| 1.1.2 PARP抑制剂抗肿瘤机制研究现状 | 第24-26页 |
| 1.2 PARP抑制剂研发与应用进展 | 第26-27页 |
| 1.3 PARP抑制剂耐药机制 | 第27-33页 |
| 1.3.1 药物外排 | 第27-28页 |
| 1.3.2 靶点变化 | 第28-29页 |
| 1.3.3 DNA损伤生成减少 | 第29页 |
| 1.3.4 DNA损伤修复增加 | 第29-32页 |
| 1.3.5 PARP抑制剂耐药机制特点 | 第32-33页 |
| 1.4 存在问题 | 第33-34页 |
| 1.4.1 PARP抑制剂抗肿瘤机制存在的问题 | 第33-34页 |
| 1.4.2 PARP抑制剂耐药研究存在的问题 | 第34页 |
| 1.5 研究方案 | 第34-36页 |
| 1.5.1 PARP抑制剂抗肿瘤机制研究方案 | 第35页 |
| 1.5.2 PARP抑制剂耐药机制研究方案 | 第35-36页 |
| 第2章 PARP抑制剂抗肿瘤机制研究 | 第36-92页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-52页 |
| 2.1.1 药物、试剂及抗体 | 第36-37页 |
| 2.1.2 质粒与菌种 | 第37页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第37-38页 |
| 2.1.4 细胞培养 | 第38页 |
| 2.1.5 细胞毒性实验 | 第38-39页 |
| 2.1.6 亚细胞蛋白组分分离 | 第39页 |
| 2.1.7 Western Blot | 第39-40页 |
| 2.1.8 siRNA干扰 | 第40页 |
| 2.1.9 TALEN 技术敲除 PARP1 | 第40页 |
| 2.1.10 PARP1 TALEN 敲除区域测序验证 | 第40-42页 |
| 2.1.11 pLEX-MCS PARP1-WT 慢病毒表达质粒构建 | 第42-43页 |
| 2.1.12 定点突变 | 第43-44页 |
| 2.1.13 PARP1回补细胞株的构建 | 第44-45页 |
| 2.1.14 细胞内PAR生成检测 | 第45页 |
| 2.1.15 流式细胞术检测细胞周期 | 第45-46页 |
| 2.1.16 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第46页 |
| 2.1.17 细胞免疫荧光检测 | 第46-47页 |
| 2.1.18 pFastBac HTb-PARP1 突变质粒构建 | 第47页 |
| 2.1.19 PARP1蛋白表达 | 第47-49页 |
| 2.1.20 PARP1蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 2.1.21 PARP1蛋白鉴定 | 第50页 |
| 2.1.22 PARP1蛋白酶活检测 | 第50-51页 |
| 2.1.23 表面等离子体共振(SPR) | 第51页 |
| 2.1.24 荧光偏振检测 PARP1 蛋白与 DNA 的结合 | 第51页 |
| 2.1.25 荧光各向异性 PARP1-DNA 结合分析 | 第51-52页 |
| 2.1.26 相关性分析 | 第52页 |
| 2.2 结果 | 第52-89页 |
| 2.2.1 PARP 抑制剂的细胞毒性与 PARP1 捕获 | 第52-57页 |
| 2.2.2 建立PARP1敲除细胞模型 | 第57-68页 |
| 2.2.3 PARP1 酶活缺陷与 DNA 以及反应底物结合的关系 | 第68-72页 |
| 2.2.4 PARP 抑制剂细胞毒性与 PARP 酶活及 PARP1 捕获的关系 | 第72-77页 |
| 2.2.5 PARP 抑制剂酶活抑制与 PARP1-DNA 复合物形成的关系 | 第77-89页 |
| 2.3 讨论 | 第89-92页 |
| 第3章 PARP抑制剂耐药特性与机制研究 | 第92-140页 |
| 3.1 材料与方法 | 第92-105页 |
| 3.1.1 药物、试剂及抗体 | 第92-93页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第93-94页 |
| 3.1.3 细胞培养 | 第94页 |
| 3.1.4 细胞形态学鉴定 | 第94页 |
| 3.1.5细胞迁移实验 | 第94页 |
| 3.1.6 细胞毒性实验(SRB) | 第94-95页 |
| 3.1.7 生长曲线及倍增时间测定 | 第95页 |
| 3.1.8 Western Blot | 第95页 |
| 3.1.9 流式细胞术检测细胞周期 | 第95-96页 |
| 3.1.10 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第96页 |
| 3.1.11 亚细胞蛋白组分分离 | 第96-97页 |
| 3.1.12 细胞内PAR生成检测 | 第97页 |
| 3.1.13 基因组 DNA 提取及 PCR 测序 | 第97-98页 |
| 3.1.14 RNA 提取及反转录 c DNA | 第98-100页 |
| 3.1.15 siRNA干扰 | 第100页 |
| 3.1.16 CRISPR-Cas9 敲除 | 第100-101页 |
| 3.1.17 细胞免疫荧光检测 | 第101页 |
| 3.1.18 双尾彗星实验 | 第101-102页 |
| 3.1.19 转移酶介导的 dUTP 缺口原位末端标记法(TUNEL) | 第102页 |
| 3.1.20 台盼蓝染色 | 第102页 |
| 3.1.21 β-半乳糖苷酶染色 | 第102-103页 |
| 3.1.22 RealTime-Glo? Annexin V 细胞凋亡实验 | 第103页 |
| 3.1.23 Caspase 活性实验 | 第103页 |
| 3.1.24 线粒体膜电位检测 | 第103页 |
| 3.1.25 转录组测序(RNA-Seq) | 第103-104页 |
| 3.1.26 RT-PCR(Rela-Time PCR) | 第104-105页 |
| 3.1.27 统计分析 | 第105页 |
| 3.2 结果 | 第105-136页 |
| 3.2.1 PARP抑制剂耐药细胞株的建立与耐药特性 | 第105-110页 |
| 3.2.2 已知机制对建立的PARP抑制剂耐药细胞的耐药性的贡献 | 第110-113页 |
| 3.2.3 PARP 抑制剂耐药新机制：BRCA2 新剪接体 | 第113-122页 |
| 3.2.4 PARP 抑制剂耐药细胞株 DNA 损伤蓄积增加 | 第122-125页 |
| 3.2.5 PARP抑制剂耐药细胞呈现凋亡耐受 | 第125-130页 |
| 3.2.6 COX-2/BIRC3 过表达介导 PARP 抑制剂耐药细胞株凋亡耐受 | 第130-136页 |
| 3.3 讨论 | 第136-140页 |
| 第4章 总结与尚待解决的问题 | 第140-143页 |
| 4.1 总结 | 第140-142页 |
| 4.1.1 抗肿瘤机制方面 | 第140-141页 |
| 4.1.2 耐药机制方面 | 第141-142页 |
| 4.2 尚待解决的问题 | 第142-143页 |
| 4.2.1 PARP抑制剂抗肿瘤机制研究相关问题 | 第142页 |
| 4.2.2 PARP抑制剂耐药机制研究相关问题 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-156页 |
| 致谢 | 第156-158页 |
| 附录一 研究生期间已发表及待发表文章 | 第158-162页 |
| 附录二 研究生期间参加学术会议 | 第162-163页 |
| 附录三 研究生期间所获奖励 | 第163-168页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第168页 |
