| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第10-27页 |
| 1 香菇概述 | 第10-14页 |
| 1.1 香菇分类及分布 | 第10页 |
| 1.2 香菇的营养价值 | 第10页 |
| 1.3 香菇的生活史 | 第10-11页 |
| 1.4 香菇的栽培史 | 第11页 |
| 1.5 香菇的生物学特性 | 第11页 |
| 1.6 香菇的生长条件 | 第11-14页 |
| 1.6.1 营养 | 第12页 |
| 1.6.2 温度 | 第12-13页 |
| 1.6.3 湿度 | 第13页 |
| 1.6.4 光照 | 第13页 |
| 1.6.5 空气 | 第13页 |
| 1.6.6 酸碱度 | 第13-14页 |
| 2 琥珀酸脱氢酶及琥珀酸脱氢酶类杀菌剂的概述 | 第14-15页 |
| 2.1 琥珀酸脱氢酶 | 第14页 |
| 2.2 琥珀酸脱氢酶类杀菌剂 | 第14-15页 |
| 2.3 萎锈灵及萎锈灵对担子菌的特异性 | 第15页 |
| 2.4 萎锈灵抗性基因 | 第15页 |
| 3 食用菌遗传转化的研究 | 第15-24页 |
| 3.1 食用菌遗传转化常用方法 | 第16-19页 |
| 3.1.1 基因枪转化法 | 第16-17页 |
| 3.1.2 电激转化法 | 第17页 |
| 3.1.3 PEG介导转化法 | 第17页 |
| 3.1.4 限制性内切酶转化法 | 第17-18页 |
| 3.1.5 农杆菌介导的转化法 | 第18-19页 |
| 3.2 食用菌转化常用的启动子 | 第19页 |
| 3.3 现阶段食用菌转化常用的选择标记基因 | 第19-24页 |
| 3.3.1 抗生素抗性筛选标记 | 第19-20页 |
| 3.3.2 安全选择标记基因 | 第20-21页 |
| 3.3.3 报道基因 | 第21-24页 |
| 4 农杆菌介导法在食用菌中的应用 | 第24-25页 |
| 5 现阶段食用菌中常用标记基因存在的问题 | 第25页 |
| 6 同源标筛选标记基因的优势 | 第25页 |
| 7 同源性标记基因在食用菌中的应用 | 第25-26页 |
| 8 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-39页 |
| 1 实验所用培养基 | 第27-28页 |
| 2 主要仪器 | 第28页 |
| 3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1 构建萎锈灵抗性基因载体所用试剂和酶 | 第28页 |
| 3.2 DNA提取试剂 | 第28-29页 |
| 3.3 PCR扩增所用试剂 | 第29页 |
| 3.4 电泳所用溶液 | 第29页 |
| 3.5 转化所用试剂 | 第29页 |
| 4 供试菌株和质粒 | 第29-30页 |
| 5 实验方法与步骤 | 第30-39页 |
| 5.1 真菌萎锈灵抗性发生位点的统计分析 | 第30-31页 |
| 5.2 香菇琥珀酸脱氢酶B亚基与萎锈灵抗性真菌琥珀酸脱氢酶B亚基蛋白序列比对 | 第31页 |
| 5.3 改造香菇琥珀酸脱氢酶B亚基序列 | 第31页 |
| 5.4 香菇萎锈灵抗性基因载体构建 | 第31-33页 |
| 5.5 萎锈灵抗性基因载体转化大肠杆菌 | 第33-34页 |
| 5.6 提取质粒 | 第34页 |
| 5.7 小米粒培养基制备 | 第34页 |
| 5.8 香菇菌丝接种小米粒培养基 | 第34页 |
| 5.9 香菇菌丝萎锈灵抗性试验 | 第34-35页 |
| 5.10 农杆菌工程菌株制备 | 第35页 |
| 5.11 质粒的导入的PCR检测 | 第35页 |
| 5.12 农杆菌的活化 | 第35页 |
| 5.13 香菇菌丝的转化 | 第35-36页 |
| 5.14 转化子的稳定性分析 | 第36页 |
| 5.15 转化子PCR验证 | 第36-37页 |
| 5.16 PCR扩增产物测序 | 第37-38页 |
| 5.17 报告基因绿色荧光蛋白EGFP表达检测 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-51页 |
| 1 真菌萎锈灵抗性发生位点分析 | 第39页 |
| 2 香菇B亚基蛋白序列与抗性真菌B亚基蛋白序列比对 | 第39-40页 |
| 3 香菇琥珀酸脱氢酶B亚基的改造 | 第40页 |
| 4 构建香菇萎锈灵抗性基因载体 | 第40-44页 |
| 5 萎锈灵抗性基因载体转化大肠杆菌 | 第44页 |
| 6 香菇菌丝萎锈灵抗性试验 | 第44-46页 |
| 7 农杆菌工程菌株中CbxR的检测 | 第46页 |
| 8 转化子的筛选 | 第46-47页 |
| 9 两个农杆菌株对不同香菇受体转化效率的比较 | 第47-48页 |
| 10 两个农杆菌株对香菇受体转化稳定性的比较 | 第48页 |
| 11 转化子中CbxR基因的检测 | 第48-49页 |
| 12 转化子中绿色荧光蛋白EGFP的表达 | 第49-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-53页 |
| 1 真菌萎锈灵抗性发生位点的分析 | 第51页 |
| 2 香菇B亚基蛋白序列与抗性真菌B亚基蛋白序列比对分析 | 第51页 |
| 3 香菇B亚基的改造分析 | 第51页 |
| 4 香菇菌丝萎锈灵抗性试验分析 | 第51-52页 |
| 5 不同农杆菌菌株对转化率高低的影响 | 第52页 |
| 6 转化子的筛选分析 | 第52页 |
| 7 转化效率和稳定性分析 | 第52页 |
| 8 转化子中绿色荧光蛋白EGFP的表达分析 | 第52-53页 |
| 第五章 总结与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 缩略词 | 第61-62页 |
| 学术成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
