| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩写说明 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 水杨酸生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.1 SA与植物抗病反应 | 第14-16页 |
| 1.2 SA与植物衰老 | 第16页 |
| 1.3 SA与植物抗环境胁迫 | 第16-17页 |
| 1.4 其他功能 | 第17页 |
| 2 水杨酸的合成代谢研究 | 第17-19页 |
| 2.1 ICS路径 | 第18页 |
| 2.2 PAL路径 | 第18-19页 |
| 3 水杨酸的分解代谢研究 | 第19-21页 |
| 3.1 糖基化 | 第19-20页 |
| 3.2 甲基化 | 第20页 |
| 3.3 羟基化 | 第20-21页 |
| 3.4 氨基酸化 | 第21页 |
| 3.5 磺化反应 | 第21页 |
| 4 水杨酸代谢的调控 | 第21-22页 |
| 5 突变体筛选方法 | 第22-23页 |
| 6 研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 水杨酸代谢突变体的筛选及克隆 | 第24-50页 |
| 1 材料与方法 | 第24-33页 |
| 1.1 供试材料 | 第24页 |
| 1.2 供试菌株、载体和酶 | 第24-25页 |
| 1.3 拟南芥的种植 | 第25页 |
| 1.4 EMS诱变及筛选 | 第25-26页 |
| 1.4.1 EMS诱变 | 第25-26页 |
| 1.4.2 水杨酸代谢突变体的筛选 | 第26页 |
| 1.4.3 水杨酸代谢突变体的表型和代谢分析 | 第26页 |
| 1.5 WS s3h*s5h双突变体的创制 | 第26-31页 |
| 1.5.1 S3H和5HpYAO-based CRISPR/Cas9载体的构建[73] | 第26-30页 |
| 1.5.1.1 靶点gRNA的设计 | 第26-27页 |
| 1.5.1.2 构建pYAO-based CRISPR/Cas9质粒 | 第27-30页 |
| 1.5.2 Ws转基因和WS s3h*s5h双突变体鉴定 | 第30-31页 |
| 1.5.2.1 Ws转基因 | 第30-31页 |
| 1.5.2.2 WS s3h*s5h双突变体鉴定 | 第31页 |
| 1.6 拟南芥材料的杂交和回交 | 第31-32页 |
| 1.7 水杨酸代谢突变体的重测序和基因定位 | 第32-33页 |
| 1.7.1 CTAB法提取拟南芥DNA | 第32页 |
| 1.7.2 水杨酸代谢突变体的重测序和基因定位 | 第32-33页 |
| 1.7.3 水杨酸代谢突变体的基因克隆 | 第33页 |
| 1.8 水杨酸含量的测定 | 第33页 |
| 2. 结果与分析 | 第33-48页 |
| 2.1 SID2和NPR1可以互补双突变体衰老表型 | 第34-35页 |
| 2.2 水杨酸代谢相关突变体的筛选 | 第35-42页 |
| 2.2.1 叶片变大、晚衰且SA含量降低的突变体 | 第36-38页 |
| 2.2.2 叶片变大、早衰且SA含量未变的突变体 | 第38-39页 |
| 2.2.3 叶片变大、晚衰且SA含量未变的突变体 | 第39-40页 |
| 2.2.4 叶片变小、晚衰且SA含量降低的突变体 | 第40-41页 |
| 2.2.5 相似苗杂交表型及代谢统计 | 第41-42页 |
| 2.3 Ws s3h*s5h的突变体的创制和表型、代谢分析 | 第42-46页 |
| 2.3.1 S3H和S5HpYAO-based CRISPR/Cas9载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.3.2 WS转基因和WS s3h*s5h双突变体鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4 水杨酸代谢突变体的重测序和基因定位 | 第46-48页 |
| 3. 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 拟南芥S5H同源基因DLO2的功能分析 | 第50-64页 |
| 1. 材料与方法 | 第50-58页 |
| 1.1 试验材料 | 第50页 |
| 1.2 供试菌株、载体和酶 | 第50-51页 |
| 1.3 DLO2体外酶活测定 | 第51-53页 |
| 1.3.1 蛋白载体的构建 | 第51页 |
| 1.3.1.1 基因的扩增 | 第51页 |
| 1.3.1.2 载体的构建 | 第51页 |
| 1.3.2 蛋白表达纯化 | 第51-52页 |
| 1.3.3 酶活的测定 | 第52-53页 |
| 1.4 DLO2突变体的鉴定和表型、代谢分析 | 第53-54页 |
| 1.4.1 CRISPR Cas9/gRNA载体的构建 | 第53-54页 |
| 1.4.2 拟南芥转基因与转基因苗的筛选 | 第54页 |
| 1.5 DLO2超表达植株创制和表型、代谢分析 | 第54-58页 |
| 1.5.1 DLO2超表达植株载体的构建 | 第54-57页 |
| 1.5.1.1 拟南芥RNA的提取 | 第54-55页 |
| 1.5.1.2 RNA反转录 | 第55页 |
| 1.5.1.3 DLO2基因的扩增 | 第55-56页 |
| 1.5.1.4 pCR8载体的获得 | 第56页 |
| 1.5.1.5 SLIC构建入门载体 | 第56页 |
| 1.5.1.6 大肠杆菌转化及PCR验证和酶切验证 | 第56-57页 |
| 1.5.1.7 Gateway BP反应[72] | 第57页 |
| 1.5.2 拟南芥转基因与转基因苗的筛选 | 第57页 |
| 1.5.3 DLO2超表达表型、代谢分析 | 第57-58页 |
| 2. 结果与分析 | 第58-62页 |
| 2.1 系统进化树的构建 | 第58页 |
| 2.2 酶的生化活性 | 第58-59页 |
| 2.3 CRISPR Cas9技术创制突变体表型及代谢分析 | 第59-61页 |
| 2.3.1 CRISPR Cas9技术创制突变体s3h*s5h*dlo2表型及代谢分析 | 第59-60页 |
| 2.3.2 CRISPR Cas9技术创制突变体s5h*dlo2表型及代谢分析 | 第60-61页 |
| 2.4 拟南芥中超表达转基因植物的表型和代谢分析 | 第61-62页 |
| 3. 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
