| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 大肠杆菌表达系统 | 第11-14页 |
| ·pET表达系统简介 | 第11-12页 |
| ·pET表达载体 | 第12-13页 |
| ·原核表达宿主菌株 | 第13-14页 |
| ·蛋白酶缺陷型溶原菌 | 第13页 |
| ·增强可溶性的溶原菌 | 第13-14页 |
| ·补充稀有密码子的溶原菌 | 第14页 |
| 2 生长素受体蛋白与生长素的相互作用机制研究进展 | 第14-21页 |
| ·生长素结合蛋白ABP1 | 第15-16页 |
| ·生长素受体蛋白TIR1 | 第16-18页 |
| ·生长素受体蛋白与生长素的相互作用机制 | 第18-20页 |
| ·Aux/IAAs蛋白家族 | 第18-19页 |
| ·生长素响应因子蛋白家族 | 第19页 |
| ·泛素介导的蛋白质降解途径 | 第19-20页 |
| ·ABP1和TIR1与生长素的亲和活性比较 | 第20-21页 |
| 3 立论依据及研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 OsABP1原核表达及蛋白质纯化 | 第23-41页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·质粒和原核表达菌株 | 第23页 |
| ·具酶和其它试剂 | 第23页 |
| ·常用实验室仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-33页 |
| ·ABP1基因cDNA克隆 | 第24-28页 |
| ·水稻RNA提取及质量判断 | 第24页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR扩增ABP1 cDNA | 第25页 |
| ·扩增产物的回收 | 第25-26页 |
| ·ABP1基因cDNA扩增回收产物与pMD19-T载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌DH5α及BL21超级感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第27页 |
| ·重组转化子鉴定 | 第27-28页 |
| ·水稻ABP1基因原核表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·ABP1-e的T载体克隆及重组子鉴定 | 第29页 |
| ·构建表达载体 | 第29页 |
| ·水稻ABP1基因的原核表达 | 第29-31页 |
| ·pET-32a-ABP1重组质粒在大杆菌中的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·ABP1基因原核表达条件的优化 | 第30页 |
| ·ABP1融合蛋白表达形式的鉴定 | 第30-31页 |
| ·ABP1融合蛋白的纯化 | 第31-33页 |
| ·Ni~(2+)-NTA的预处理 | 第31页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·ABP1 cDNA编码序列的分析 | 第33-34页 |
| ·ABP1基因的原核表达 | 第34-38页 |
| ·总RNA提取 | 第34页 |
| ·ABP1基因的cDNA克隆 | 第34页 |
| ·ABP1基因T载体克隆的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体pET-32a-ABP1的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·pET-32a-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达条件的优化 | 第36-38页 |
| ·ABP1蛋白表达形式的鉴定 | 第38页 |
| ·ABP1蛋白的纯化结果及蛋白浓度的测定 | 第38-39页 |
| ·ABP1蛋白的纯化结果分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 OsTIR1原核表达及蛋白质纯化 | 第41-52页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·质粒和原核表达菌株 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-47页 |
| ·TIR1 cDNA克隆 | 第41-43页 |
| ·水稻RNA提取及质量判断 | 第41页 |
| ·RT-PCR扩增TIR1 cDNA | 第41-42页 |
| ·目的片段的T载体克隆 | 第42页 |
| ·重组转化子鉴定 | 第42-43页 |
| ·水稻TIR1基因原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·TIR1-e的T载体克隆及重组子鉴定 | 第44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44页 |
| ·水稻TIR1基因的原核表达 | 第44-45页 |
| ·pET-32a-TIR1重组质粒在大杆菌中的诱导表达 | 第44页 |
| ·TIR1基因原核表达条件的优化 | 第44-45页 |
| ·TIR1融合蛋白表达形式的鉴定 | 第45页 |
| ·TIR1基因融合蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·包涵体纯化缓冲液的配置 | 第45-46页 |
| ·包涵体纯化步骤 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·TIR1 cDNA编码序列的分析 | 第47页 |
| ·TIR1基因的原核表达 | 第47-50页 |
| ·TIR1基因的cDNA克隆 | 第47页 |
| ·TIR1基因T载体克隆的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·pET-32a-TIR1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·表达条件的优化 | 第49-50页 |
| ·表达形式鉴定 | 第50页 |
| ·纯化结果鉴定及蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-54页 |
| 1 研究结果 | 第52页 |
| 2 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
