| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-37页 |
| ·研究背景 | 第21-35页 |
| ·幽门螺杆菌的感染现状 | 第22-23页 |
| ·幽门螺杆菌cag致病岛 | 第23-25页 |
| ·幽门螺杆菌的致病因子 | 第25-31页 |
| ·幽门螺杆菌的Ⅳ型分泌系统 | 第31-35页 |
| ·本研究的目的、内容及技术路线 | 第35-37页 |
| ·研究目的 | 第35页 |
| ·研究内容 | 第35页 |
| ·技术路线 | 第35-37页 |
| 第二章 幽门螺杆菌cagI基因的克隆与序列分析 | 第37-55页 |
| ·材料 | 第37-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要溶液的配制 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·H.pylori的培养与鉴定 | 第40页 |
| ·H pylori基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·PCR引物的设计 | 第40-41页 |
| ·PCR反应 | 第41页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·载体和目的片段的连接 | 第42页 |
| ·转化与筛选 | 第42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒中目的基因序列的检测 | 第43页 |
| ·H.pylori NCTC11637菌株cagI基因序列提交GenBank | 第43页 |
| ·H.pylori NCTC11637菌株cagI基因系统进化树的构建 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-53页 |
| ·H.pylori的分离培养与鉴定 | 第43-44页 |
| ·PCR法扩增H.pylori cagI基因片段 | 第44页 |
| ·TA克隆与鉴定 | 第44-45页 |
| ·H.pylori NCTC11637菌株cagI基因的测序结果 | 第45页 |
| ·H.pylori NCTC11637菌株cagI基因核苷酸序列及蛋白序列同源性比较 | 第45-50页 |
| ·cagI编码蛋白的理化特性分析 | 第50页 |
| ·H.pylori NCTC11637菌株cagI基因及CagI蛋白进行系统进化树分析 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 幽门螺杆菌cagI基因的原核表达及其抗体制备 | 第55-67页 |
| ·材料 | 第55-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要溶液配制 | 第56-58页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第59页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第59页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·纯化产物的SDS-PAGE及Western Blot分析 | 第60页 |
| ·重组蛋白的复性、浓缩 | 第60-61页 |
| ·抗重组CagI蛋白抗体的制备及效价测定 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-64页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第62页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与鉴定 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第63页 |
| ·目的蛋白的纯化、复性及浓缩 | 第63-64页 |
| ·抗体效价测定 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 CagI蛋白的亚细胞定位及其互作蛋白的检测 | 第67-79页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·菌株及细胞株 | 第67页 |
| ·仪器 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要溶液配制 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-71页 |
| ·H.pylori培养及细胞培养 | 第68页 |
| ·H.pylori亚细胞分离及定位 | 第68-69页 |
| ·CagI蛋白转运实验 | 第69页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第69页 |
| ·质谱样品处理 | 第69-71页 |
| ·His-CagI大肠杆菌细胞总蛋白的提取 | 第71页 |
| ·Pull-down | 第71页 |
| ·结果 | 第71-75页 |
| ·CagI蛋白亚细胞定位 | 第71-72页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第72页 |
| ·Pull-down实验 | 第72-73页 |
| ·质谱分析鉴定 | 第73-75页 |
| ·CagI蛋白转运检测 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-79页 |
| 第五章 幽门螺杆菌cagI基因及cagL基因缺失株的构建 | 第79-87页 |
| ·材料 | 第79页 |
| ·菌株与载体 | 第79页 |
| ·主要溶液 | 第79页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-82页 |
| ·细菌的培养 | 第79-80页 |
| ·自杀质粒同源片段的扩增 | 第80-81页 |
| ·自杀质粒pBluescript/△cagI::KM~r及pBluescript/△cagL::KM~r的构建 | 第81页 |
| ·cagI及cagL基因缺失株的构建 | 第81-82页 |
| ·cagI及cagL基因缺失株的鉴定 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-85页 |
| ·cagI基因缺失自杀质粒的构建 | 第82-83页 |
| ·cagI基因缺失株的鉴定 | 第83-84页 |
| ·cagI基因缺失自杀质粒的构建 | 第84页 |
| ·cagI基因缺失株的鉴定 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 幽门螺杆菌cagI基因缺失株对CagA蛋白转运及其粘附功能的影响 | 第87-93页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·细胞、菌株 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·主要溶液 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-88页 |
| ·细菌和细胞的培养 | 第87页 |
| ·CagA蛋白转运实验 | 第87-88页 |
| ·菌落形成实验 | 第88页 |
| ·统计分析 | 第88页 |
| ·结果 | 第88-89页 |
| ·cagI基因缺失前后对CagA蛋白转运能力的影响 | 第88-89页 |
| ·cagI基因缺失前后对H.pylori粘附作用的影响 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| 第七章 主要结论及展望 | 第93-95页 |
| ·主要结论 | 第93页 |
| ·展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 读博期间发表的论文和参加的课题 | 第115-116页 |
