| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 类胡萝卜素 | 第11-19页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素的代谢途径 | 第11-13页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素合成途径中的主要酶和基因 | 第13-17页 |
| 1.1.3 植物类胡萝卜素代谢的调控 | 第17-19页 |
| 1.2 类黄酮/花青素 | 第19-22页 |
| 1.2.1 花青素合成途径 | 第19-20页 |
| 1.2.2 花青素合成途径中的主要酶 | 第20-22页 |
| 1.3 差异表达基因的分离方法 | 第22-25页 |
| 1.3.1 mRNA 的差异显示技术 | 第23页 |
| 1.3.2 抑制消减杂交 | 第23页 |
| 1.3.3 基因表达系列分析法 | 第23-24页 |
| 1.3.4 cDNA 微列阵 | 第24页 |
| 1.3.5 cDNA-AFLP 技术 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题的立题依据、研究内容和目标 | 第25-27页 |
| 2 桂花花瓣中胡萝卜素和叶黄素含量的 HPLC 分析 | 第27-37页 |
| 2.1 类胡萝卜素的定量分析方法 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料、试剂和仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.3.1 桂花花瓣中类胡萝卜素的提取 | 第29页 |
| 2.3.2 标准品标准曲线的绘制和样品的上样分析 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.4.1 类胡萝卜素标准品标准曲线的绘制 | 第30-33页 |
| 2.4.2 不同时期桂花花瓣中类胡萝卜素含量的分析 | 第33-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-37页 |
| 3 桂花花瓣类胡萝卜素和花青素代谢途径相关基因片段的克隆及 RT-PCR 分析 | 第37-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 质粒载体和菌株 | 第37页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 桂花花瓣 RNA 的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.2 RNA 的反转录 | 第38页 |
| 3.2.3 类胡萝卜素和花青素代谢途径相关基因部分序列的获得 | 第38-40页 |
| 3.2.4 扩增片段的回收 | 第40页 |
| 3.2.5 E.coli 感受态细胞的制备、目的片段的克隆与转化 | 第40-41页 |
| 3.2.6 RT-PCR 检测基因的相对表达量 | 第41-42页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第42-52页 |
| 3.3.1 类胡萝卜素和花青素代谢途径相关基因部分序列的克隆和序列分析 | 第42-51页 |
| 3.3.2 类胡萝卜素代谢途径相关基因的 RT-PCR 分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 花青素代谢途径相关基因的 RT-PCR 分析 | 第52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-55页 |
| 4 OfCCD4 基因启动子的克隆以及启动子和第一外显子 CG 岛的甲基化分析 | 第55-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 4.1.2 质粒载体和菌株 | 第55页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 花瓣 DNA 的提取 | 第56页 |
| 4.2.2 DNA 的酶切、连接、扩增及纯化测序 | 第56-57页 |
| 4.2.3 OfCCD4 基因启动子序列分析和 CG 岛甲基化分析 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-63页 |
| 4.3.1 OfCCD4 基因启动子区域的获得及序列分析 | 第58-60页 |
| 4.3.2 OfCCD4 基因启动子区域 CG 岛的甲基化分析 | 第60-63页 |
| 4.3.3 OfCCD4 基因第一外显子的甲基化分析 | 第63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 5 桂花 PSY 基因和 WRKY 转录因子的克隆及序列分析 | 第65-79页 |
| 5.1 实验材料和方法 | 第67页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第67页 |
| 5.1.2 质粒载体和菌株 | 第67页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-71页 |
| 5.2.1 花瓣 RNA 的提取 | 第67页 |
| 5.2.2 RNA 的反转录 | 第67-68页 |
| 5.2.3 桂花 PSY 基因和 WRKY 转录因子的克隆 | 第68-71页 |
| 5.3 结果与分析 | 第71-78页 |
| 5.3.1 桂花 PSY 基因全长的获得和序列分析 | 第71页 |
| 5.3.2 桂花 WRKY 基因全长的获得和序列分析 | 第71-78页 |
| 5.3.3 桂花 WRKY 基因的 RT-PCR 分析 | 第78页 |
| 5.4 讨论 | 第78-79页 |
| 6 OfWRKY3 基因与 OfCCD4 基因启动子区域 W-box 元件的相互作用分析 | 第79-87页 |
| 6.1 实验材料和方法 | 第79-80页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第79页 |
| 6.1.2 质粒载体和菌株 | 第79页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第79页 |
| 6.1.4 实验溶液 | 第79-80页 |
| 6.2 实验方法 | 第80-83页 |
| 6.2.1 花瓣 RNA 的提取 | 第80页 |
| 6.2.2 RNA 的反转录 | 第80页 |
| 6.2.3 w-box 元件的合成 | 第80页 |
| 6.2.4 pLacZi-W-box 重组质粒的构建 | 第80-81页 |
| 6.2.5 pBD42AD-OfWRKY3 重组质粒的构建 | 第81-82页 |
| 6.2.6 酵母感受态的制备和转化 | 第82-83页 |
| 6.2.7 酵母阳性克隆的筛选 | 第83页 |
| 6.3 结果与分析 | 第83-84页 |
| 6.3.1 pB42AD-OfWRKY 和 pLacZi-W-box 重组载体的构建 | 第83-84页 |
| 6.3.2 酵母单杂交阳性克隆的显色 | 第84页 |
| 6.4 讨论 | 第84-87页 |
| 7 籽银桂和橙红丹桂盛花期花瓣的 cDNA-AFLP 分析及桂花 MYB1 基因的克隆 | 第87-99页 |
| 7.1 实验材料和方法 | 第87页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第87页 |
| 7.1.2 质粒载体和菌株 | 第87页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第87页 |
| 7.2 实验方法 | 第87-90页 |
| 7.2.1 花瓣 RNA 的提取 | 第87页 |
| 7.2.2 RNA 的反转录 | 第87页 |
| 7.2.3 双链 cDNA 的合成 | 第87-88页 |
| 7.2.4 双链 cDNA 的双酶切、接头的连接和产物的扩增 | 第88页 |
| 7.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染和差异片段的回收 | 第88-90页 |
| 7.2.6 MYB1 基因的克隆 | 第90页 |
| 7.3 结果与分析 | 第90-97页 |
| 7.3.1 cDNA-AFLP 聚丙烯酰胺电泳结果 | 第90页 |
| 7.3.2 cDNA-AFLP 差异片段的回收测序 | 第90-95页 |
| 7.3.3 MYB1 基因全长的获得和序列分析 | 第95-97页 |
| 7.4 讨论 | 第97-99页 |
| 8 结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 附录 | 第115-129页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
