| 第一篇 棉花纤维素生物合成复合体及相关蛋白功能分析 | 第8-83页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1. 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 纤维素 | 第13-15页 |
| 1.1.1 纤维素结构 | 第13页 |
| 1.1.2 植物细胞壁 | 第13-15页 |
| 1.2 纤维素合酶 | 第15-24页 |
| 1.2.1 纤维素合酶 | 第15-17页 |
| 1.2.2 纤维素合酶复合体 | 第17-18页 |
| 1.2.3 纤维素合酶突变体 | 第18-20页 |
| 1.2.4 纤维素合酶酶学 | 第20-22页 |
| 1.2.5 纤维素合酶修饰 | 第22页 |
| 1.2.6 纤维素合酶复合体的装配和转运 | 第22-24页 |
| 1.3 纤维素生物合成相关蛋白 | 第24-31页 |
| 1.3.1 CESA互作蛋白 | 第24-27页 |
| 1.3.2 纤维素合成相关蛋白 | 第27-31页 |
| 1.3.2.1 KORRIGAN | 第27-28页 |
| 1.3.2.2 β-谷甾醇糖苷及甾醇糖苷转移酶 | 第28-30页 |
| 1.3.2.3 细胞骨架 | 第30页 |
| 1.3.2.4 其它 | 第30-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 2. 材料与方法 | 第33-57页 |
| 2.1 材料 | 第33页 |
| 2.2 菌株和载体 | 第33-35页 |
| 2.3 方法 | 第35-57页 |
| 2.3.1 棉花纤维素体外合成 | 第35-41页 |
| 2.3.1.1 纤维原生质膜的提取 | 第35页 |
| 2.3.1.2 纤维素体外(in vitro)合成 | 第35页 |
| 2.3.1.3 体外合成产物检测 | 第35-36页 |
| 2.3.1.4 抗体制备 | 第36-38页 |
| 2.3.1.5 免疫共沉淀(Co-IP)分离纤维素合酶复合体 | 第38-39页 |
| 2.3.1.6 Co-IP分离复合体的免疫印迹检测 | 第39-41页 |
| 2.3.1.7 Co-IP分离产物的纤维素合成 | 第41页 |
| 2.3.2 Co-IP分离产物分析和鉴定 | 第41-44页 |
| 2.3.2.1 SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| 2.3.2.2 2D-PAGE分析 | 第41-43页 |
| 2.3.2.3 LC-MS鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.3 棉花甾醇糖苷转移酶基因克隆和表达分析 | 第44-53页 |
| 2.3.3.1 棉花纤维RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.3.3.2 DNA的去除 | 第45页 |
| 2.3.3.3 第一链cDNA的合成 | 第45-46页 |
| 2.3.3.4 RACE法扩增cDNA末端 | 第46-50页 |
| 2.3.3.5 PCR产物加尾及回收 | 第50-51页 |
| 2.3.3.6 PCR回收产物连接 | 第51页 |
| 2.3.3.7 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第51页 |
| 2.3.3.8 连接产物转化DH5α | 第51-52页 |
| 2.3.3.9 菌落PCR检测阳性克隆 | 第52页 |
| 2.3.3.10 质粒提取 | 第52页 |
| 2.3.3.11 Real-time定量分析 | 第52-53页 |
| 2.3.4 棉花甾醇糖苷转移酶亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 2.3.5 棉花甾醇糖苷转移酶活性分析 | 第54-56页 |
| 2.3.5.1 甾醇糖苷转移酶表达载体的构建 | 第54页 |
| 2.3.5.2 蛋白浓度测定 | 第54-55页 |
| 2.3.5.3 甾醇糖苷转移酶活性分析 | 第55-56页 |
| 2.3.5.4 纤维总甾醇的提取 | 第56页 |
| 2.3.5.5 甾醇糖苷转移酶合成产物鉴定 | 第56页 |
| 2.3.6 棉花热激处理 | 第56-57页 |
| 3. 结果与分析 | 第57-76页 |
| 3.1 外源纤维素酶添加与体外纤维素合成 | 第57-58页 |
| 3.2 Co-IP分离鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3 2D-PAGE和SDS-PAGE检测 | 第59-61页 |
| 3.4 LC-MS鉴定 | 第61-65页 |
| 3.5 棉花甾醇糖苷转移酶基因克隆和生物信息学分析 | 第65-68页 |
| 3.6 棉花甾醇糖苷转移酶活性分析 | 第68-74页 |
| 3.6.1 酶纯化及酶活性 | 第68-72页 |
| 3.6.2 酶动力学 | 第72-73页 |
| 3.6.3 酶合成反应条件 | 第73-74页 |
| 3.7 棉花甾醇糖苷转移酶表达分析及热激反应 | 第74-76页 |
| 4. 讨论 | 第76-82页 |
| 4.1 纤维素合酶、纤维素合酶复合体和纤维素合成机理 | 第76-79页 |
| 4.2 甾醇、甾醇糖苷和甾醇糖苷转移酶与纤维素合成 | 第79-82页 |
| 5. 研究结论及工作展望 | 第82-83页 |
| 第二篇 棉花纤维KORRIGAN和木葡聚糖转移酶基因功能初探 | 第83-103页 |
| 摘要 | 第83-84页 |
| ABSTRACT | 第84-85页 |
| 1. 文献综述 | 第85-93页 |
| 2. 材料与方法 | 第93-98页 |
| 2.1 材料 | 第93页 |
| 2.2 菌株和载体 | 第93-94页 |
| 2.3 方法 | 第94-98页 |
| 2.3.1 基因克隆及载体构建 | 第94-95页 |
| 2.3.2 农杆菌转化及质粒抽提 | 第95-96页 |
| 2.3.3 花粉管通道法 | 第96页 |
| 2.3.4 转基因棉株的PCR检测 | 第96-98页 |
| 3. 结果与分析 | 第98-102页 |
| 3.1 GhXTH2/JN968478基因全长序列的获得 | 第98页 |
| 3.2 GhXTH/XET系统发生学分析 | 第98-99页 |
| 3.3 GhXTH表达分析 | 第99-100页 |
| 3.4 重组载体构建 | 第100-101页 |
| 3.5 转基因注射 | 第101-102页 |
| 4. 讨论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-127页 |
| 附录 | 第127-139页 |
| 附录1 常用试剂的配方 | 第127-132页 |
| 附录2 SGT编码序列和蛋白序列 | 第132-138页 |
| 附录3 引物序列 | 第138-139页 |
| 作者简介 | 第139-140页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第140-168页 |
| 致谢 | 第168页 |
