| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 前沿综述 | 第16-40页 |
| 1．性别决定和性别分化 | 第16-23页 |
| 1.1 性染色体和性别决定系统 | 第16-18页 |
| 1.2 性别决定基因 | 第18-20页 |
| 1.2.1 两栖动物的性别决定基因 | 第18-19页 |
| 1.2.2 鸟类的性别决定基因 | 第19页 |
| 1.2.3 哺乳动物的性别决定基因 | 第19-20页 |
| 1.2.4 鱼类的性别决定基因 | 第20页 |
| 1.3 环境性别决 | 第20-21页 |
| 1.3.1 温度对鱼类性别分化的影响 | 第21页 |
| 1.3.2 外源激素对鱼类性别分化的影响 | 第21页 |
| 1.4 性逆转 | 第21-23页 |
| 2．精子发生 | 第23-28页 |
| 2.1 精子发生 | 第23-24页 |
| 2.2 鱼类的精子发生 | 第24-28页 |
| 2.2.1 鱼类的精巢结构 | 第24-25页 |
| 2.2.2 鱼类的精巢发育 | 第25-26页 |
| 2.2.3 鱼类精子发生的特点 | 第26-28页 |
| 3．精子发生相关基因 | 第28-40页 |
| 3.1 转录因子基因 | 第28-33页 |
| 3.1.1 cAMP 应答元件结合蛋白 | 第29页 |
| 3.1.2 cAMP 应答元件调节因子 | 第29-30页 |
| 3.1.3 TATA 结合蛋白及 TBP 相似因子 | 第30-31页 |
| 3.1.4 OVOL1 | 第31页 |
| 3.1.5 SOX | 第31-32页 |
| 3.1.6 DMRT1 | 第32页 |
| 3.1.7 HOX | 第32-33页 |
| 3.1.8 锌指蛋白 | 第33页 |
| 3.2 细胞周期蛋白基因 | 第33-35页 |
| 3.3 原癌基因 | 第35-36页 |
| 3.4 细胞凋亡相关基因 | 第36-37页 |
| 3.5 热休克蛋白基因 | 第37-38页 |
| 3.6 生殖细胞特异基因与 DNA 甲基化 | 第38-39页 |
| 3.7 DNA 甲基转移酶基因 | 第39-40页 |
| 第二章 半滑舌鳎精子发生相关基因的研究 | 第40-110页 |
| 1．前言 | 第40-43页 |
| 1.1 半滑舌鳎是研究鱼类性别决定机制的理想模型 | 第40页 |
| 1.2 半滑舌鳎性别决定和分化机制的研究现状和存在的问题 | 第40-42页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第42-43页 |
| 2．样品制备与实验方法 | 第43-58页 |
| 2.1 不同基因型半滑舌鳎个体的获得 | 第43页 |
| 2.2 实验材料的收集 | 第43-44页 |
| 2.3 生理性别和遗传性别的鉴定 | 第44-46页 |
| 2.3.1 生理性别的鉴定 | 第44页 |
| 2.3.2 遗传性别的鉴定 | 第44-46页 |
| 2.4 半滑舌鳎总 RNA 的提取和第一链 cDNA 的合称 | 第46-48页 |
| 2.4.1 总 RNA 的提取 | 第46-47页 |
| 2.4.2 cDNA 的合成 | 第47-48页 |
| 2.5 实时定量 PCR（Real-time PCR） | 第48页 |
| 2.6 基因组 walking | 第48-50页 |
| 2.7 PCR 产物的克隆与测序 | 第50-51页 |
| 2.8 原位杂交（In situ hybridization，ISH） | 第51-53页 |
| 2.8.1 合成 RNA 探针 | 第51页 |
| 2.8.2 预杂交 | 第51-52页 |
| 2.8.3 切片原位杂交 | 第52-53页 |
| 2.9 染色体荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH） | 第53-56页 |
| 2.9.1 染色体的制备 | 第53页 |
| 2.9.2 阳性 BAC 克隆质粒的制备 | 第53-54页 |
| 2.9.3 Cot-1 DNA 的制备 | 第54页 |
| 2.9.4 探针的制备及变性 | 第54-55页 |
| 2.9.5 标本变性及杂交 | 第55-56页 |
| 2.10 甲基化位点预测与甲基化分析 | 第56-58页 |
| 3．半滑舌鳎 tesk1 基因的研究 | 第58-81页 |
| 3.1 引言 | 第58-59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-66页 |
| 3.2.1 tesk1 全长 cDNA 的克隆 | 第59-61页 |
| 3.2.2 tesk1 基因组 DNA 序列的扩增 | 第61-62页 |
| 3.2.3 Real-time PCR 检测 tesk1 的表达情况 | 第62-63页 |
| 3.2.4 原位杂交 | 第63页 |
| 3.2.5 染色体荧光原位杂交 | 第63页 |
| 3.2.6 基因组 walking 扩增 tesk1 启动子区域及启动子的分析 | 第63-64页 |
| 3.2.7 甲基化检测与分析 | 第64-66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-78页 |
| 3.3.1 半滑舌鳎 tesk1 全长 cDNA 序列及基因组 DNA 序列的分析 | 第66-70页 |
| 3.3.2 tesk1 多重序列比对及多基因分析 | 第70-71页 |
| 3.3.3 tesk1 在半滑舌鳎不同组织中的表达分析 | 第71页 |
| 3.3.4 tesk1 在半滑舌鳎性腺不同发育时期的表达分析 | 第71-73页 |
| 3.3.5 tesk1 在不同基因型半滑舌鳎性腺中的表达分析 | 第73页 |
| 3.3.6 原位杂交结果与 tesk1 在半滑舌鳎性腺中的细胞定位 | 第73-75页 |
| 3.3.7 tesk1 的染色体定位 | 第75-76页 |
| 3.3.8 tesk1 上游调控序列分析 | 第76页 |
| 3.3.9 甲基化分析 | 第76-78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-81页 |
| 4．半滑舌鳎 neurl3 基因的研究 | 第81-95页 |
| 4.1 引言 | 第81-82页 |
| 4.2 材料与方法 | 第82-87页 |
| 4.2.1 neurl3 全长 cDNA 的克隆和基因组 DNA 序列的扩增 | 第82-83页 |
| 4.2.2 Real-time PCR 检测 neurl3 的表达情况 | 第83页 |
| 4.2.3 原位杂交及染色体荧光原位杂交 | 第83页 |
| 4.2.4 原核表达的初步研究 | 第83-87页 |
| 4.3 结果与分析 | 第87-93页 |
| 4.3.1 半滑舌鳎 nuerl3 全长 cDNA 序列及基因组 DNA 序列的分析 | 第87-88页 |
| 4.3.2 nuerl3 在半滑舌鳎不同组织中的表达分析 | 第88页 |
| 4.3.3 nuerl3 在半滑舌鳎性腺不同发育时期的表达分析 | 第88-91页 |
| 4.3.4 原位杂交结果与 neurl3 在半滑舌鳎性腺中的细胞定位 | 第91-92页 |
| 4.3.5 nuerl3 的染色体定位 | 第92页 |
| 4.3.6 半滑舌鳎 Neurl3 原核表达初步研究 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-95页 |
| 5．半滑舌鳎 strbp 基因的研究 | 第95-110页 |
| 5.1 引言 | 第95-96页 |
| 5.2 材料与方法 | 第96-98页 |
| 5.2.1 半滑舌鳎 strbp 全长 cDNA 序列及基因组 DNA 序列的分析 | 第96页 |
| 5.2.2 Real-time PCR 检测 strbp 的表达情况 | 第96页 |
| 5.2.3 原位杂交 | 第96-97页 |
| 5.2.4 基因组 walking 扩增 strbp 启动子区域 | 第97-98页 |
| 5.3 结果与分析 | 第98-107页 |
| 5.3.1 半滑舌鳎 strbp 全长 cDNA 序列及基因组 DNA 序列的分析 | 第98-103页 |
| 5.3.2 strbp 在半滑舌鳎不同组织中的表达分析 | 第103-104页 |
| 5.3.3 strbp 在半滑舌鳎性腺不同发育时期的表达分析 | 第104-105页 |
| 5.3.4 strbp 在半滑舌鳎性腺中的细胞定位 | 第105-107页 |
| 5.3.5 strbp 上游调控序列的分析 | 第107页 |
| 5.4 讨论 | 第107-110页 |
| 第三章 大菱鲆脾脏、头肾 cDNA 文库的构建，EST 测序及免疫相关基因的筛选 | 第110-134页 |
| 1．前言 | 第110-114页 |
| 1.1 鱼的免疫 | 第110-111页 |
| 1.1.1 鱼类的免疫组织和器官 | 第110-111页 |
| 1.1.2 鱼类的免疫细胞 | 第111页 |
| 1.1.3 鱼类的体液免疫 | 第111页 |
| 1.2 表达序列标签（EST）及其应用 | 第111-112页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第112-114页 |
| 2．大菱鲆脾脏、头肾 cDNA 文库的构建 | 第114-123页 |
| 2.1 材料与方法 | 第114-119页 |
| 2.1.1 大菱鲆头肾、脾脏总 RNA 的提取 | 第114页 |
| 2.1.2 mRNA 的分离 | 第114-115页 |
| 2.1.3 逆转录合成双链 cDNA | 第115-116页 |
| 2.1.4 双链 cDNA 末端补平及加 EcoR I 接头 | 第116-117页 |
| 2.1.5 双链 cDNA 末端的磷酸化及 Xho I 酶切 | 第117页 |
| 2.1.6 双链 cDNA 和载体的连接 | 第117页 |
| 2.1.7 电转化 | 第117-119页 |
| 2.1.8 cDNA 文库库容量的估算及文库扩增 | 第119页 |
| 2.2 结果与分析 | 第119-121页 |
| 2.2.1 总 RNA 和 mRNA 质量的检测 | 第119-120页 |
| 2.2.2 第一链和双链 cDNA 的合成 | 第120-121页 |
| 2.2.3 插入片段大小的检测 | 第121页 |
| 2.2.4 库容量的估算 | 第121页 |
| 2.3 讨论 | 第121-123页 |
| 3．EST 测序及免疫相关基因的筛选 | 第123-134页 |
| 3.1 材料与方法 | 第123页 |
| 3.1.1 EST 测序 | 第123页 |
| 3.1.2 EST 序列分析及基因注释 | 第123页 |
| 3.1.3 免疫抗病相关基因的筛选 | 第123页 |
| 3.2 结果与分析 | 第123-124页 |
| 3.2.1 序列测定 | 第123页 |
| 3.2.2 EST 序列分析及免疫抗病相关基因的筛选 | 第123-124页 |
| 3.3 讨论 | 第124-134页 |
| 参考文献 | 第134-153页 |
| 学习期间发表的学术论文与研究成果 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
