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AteIF5A-2缺失及多基因共表达拟南芥提高重金属累积的研究

致谢第7-8页
摘要第8-10页
ABSTRACT第10-12页
缩略词表第13-19页
第一章 文献综述第19-33页
    1.1 重金属毒性第19-20页
    1.2 镉对植物体的毒害作用第20-21页
    1.3 镉的活化吸收和转运第21-24页
    1.4 植物体抵抗镉毒害的作用机制第24-29页
        1.4.1 菌根第24-25页
        1.4.2 细胞壁、质膜和根系分泌物第25-26页
        1.4.3 镉的螯合作用及液泡的区室化第26-29页
    1.5 镉引起的氧化胁迫第29-32页
    问题的提出第32-33页
第二章 翻译起始因子eIF5A影响拟南芥对镉的吸收和累积第33-59页
    2.1 前言第33-36页
    2.2 材料和方法第36-41页
        2.2.1 植物材料第36页
        2.2.2 插入缺失体变体fbr12的鉴定第36-37页
        2.2.3 AteIF5A-2在植物体内的表达模式第37页
        2.2.4 重金属镉处理第37-38页
        2.2.5 细胞壁提取第38页
        2.2.6 镉和钙浓度的测定第38页
        2.2.7 粗酶液提取第38-39页
        2.2.8 蛋白浓度测定第39页
        2.2.9 H_2O_2浓度测定第39页
        2.2.10 脂质过氧化产物MDA测定第39-40页
        2.2.11 抗氧化能力的测定第40页
        2.2.12 叶绿素含量测定第40页
        2.2.13 脯氨酸测定第40-41页
    2.3 结果与分析第41-54页
        2.3.1 AteIF5A-2插入突变体的鉴定第41-42页
        2.3.2 AteIF5A-2的组织特异性表达第42页
        2.3.3 AteIF5A-2插入缺失突变体较Col-0对镉敏感性增强第42-44页
        2.3.4 植株镉及钙的含量第44-47页
        2.3.5 细胞壁镉含量第47页
        2.3.6 不同浓度镉处理对拟南芥叶绿素含量的影响第47-49页
        2.3.7 不同浓度镉处理对拟南芥总抗氧化能力及膜脂质过氧化的影响第49-50页
        2.3.8 镉对过氧化氢含量的影响第50-52页
        2.3.9 镉对脯氨酸含量的影响第52页
        2.3.10 镉处理对谷胱甘肽含量的影响第52-54页
    2.4 讨论第54-57页
    小结第57-59页
第三章 不同浓度镉处理对fbr12及Col-0相关基因表达的影响第59-76页
    3.1 引言第59-60页
    3.2 材料和方法第60-63页
        3.2.1 植物材料和培养条件第60页
        3.2.2 实验方法第60页
        3.2.3 RNA提取第60-61页
        3.2.4 Real-time PCR第61-62页
        3.2.5 数据分析第62-63页
    3.3 结果与分析第63-70页
        3.3.1 镉对活性氧产生和清除相关基因表达的影响第63-67页
        3.3.2 镉对ZIP1和IRT1表达的影响第67页
        3.3.3 镉对CAX2和AtNramp3表达的影响第67页
        3.3.4 镉对PCS1和PCS2表达的影响第67-70页
    3.4 讨论第70-74页
    小结第74-76页
第四章 多基因超表达拟南芥对重金属累积的影响第76-89页
    4.1 引言第76页
    4.2 材料和方法第76-83页
        4.2.1 植物材料第76-77页
        4.2.2 菌株和载体第77页
        4.2.3 拟南芥基因组RNA的提取及反转录第77页
        4.2.4 PCR产物合成、纯化第77页
        4.2.5 BP反应第77页
        4.2.6 LR反应第77页
        4.2.7 大肠杆菌热击转化第77-78页
        4.2.8 单克隆菌落的培养和筛选第78页
        4.2.9 农杆菌真空浸润液法获得转基因拟南芥第78页
        4.2.10 Real-time PCR反应第78页
        4.2.11 多重循环Gateway LR重组第78-83页
    4.3 结果与分析第83-86页
        4.3.1 LR2-5和LR4-16的基因表达分析验证第83页
        4.3.2 转基因株系对镉的吸收和累积第83-84页
        4.3.3 转基因株系对铜的吸收和累积第84-85页
        4.3.4 转基因株系对锌的吸收和累积第85-86页
    4.4 讨论第86-88页
    小结第88-89页
第五章 结论与展望第89-91页
    5.1 主要研究结论第89页
    5.2 展望第89-91页
参考文献第91-126页
附录:铝胁迫下荞麦根系差异表达蛋白的鉴定第126-140页
    5.1 引言第126-127页
    5.2 材料和方法第127-131页
        5.2.1 植物材料和培养方法第127页
        5.2.2 处理方法第127页
        5.2.3 蛋白提取第127-128页
        5.2.4 蛋白定量第128页
        5.2.5 第一向等电聚焦第128-129页
        5.2.6 胶条平衡第129页
        5.2.7 SDS-PAGE电泳第129页
        5.2.8 染色第129-130页
        5.2.9 图像采集和分析第130页
        5.2.10 蛋白质的质谱鉴定第130-131页
    5.3 结果与分析第131-135页
        5.3.1 荞麦根总蛋白表达谱分析第131-135页
    5.4 讨论第135-137页
    小结第137-138页
    参考文献第138-140页
作者简历及攻读博士期间论文发表情况第140-141页

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