致谢 | 第7-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
缩略词表 | 第13-19页 |
第一章 文献综述 | 第19-33页 |
1.1 重金属毒性 | 第19-20页 |
1.2 镉对植物体的毒害作用 | 第20-21页 |
1.3 镉的活化吸收和转运 | 第21-24页 |
1.4 植物体抵抗镉毒害的作用机制 | 第24-29页 |
1.4.1 菌根 | 第24-25页 |
1.4.2 细胞壁、质膜和根系分泌物 | 第25-26页 |
1.4.3 镉的螯合作用及液泡的区室化 | 第26-29页 |
1.5 镉引起的氧化胁迫 | 第29-32页 |
问题的提出 | 第32-33页 |
第二章 翻译起始因子eIF5A影响拟南芥对镉的吸收和累积 | 第33-59页 |
2.1 前言 | 第33-36页 |
2.2 材料和方法 | 第36-41页 |
2.2.1 植物材料 | 第36页 |
2.2.2 插入缺失体变体fbr12的鉴定 | 第36-37页 |
2.2.3 AteIF5A-2在植物体内的表达模式 | 第37页 |
2.2.4 重金属镉处理 | 第37-38页 |
2.2.5 细胞壁提取 | 第38页 |
2.2.6 镉和钙浓度的测定 | 第38页 |
2.2.7 粗酶液提取 | 第38-39页 |
2.2.8 蛋白浓度测定 | 第39页 |
2.2.9 H_2O_2浓度测定 | 第39页 |
2.2.10 脂质过氧化产物MDA测定 | 第39-40页 |
2.2.11 抗氧化能力的测定 | 第40页 |
2.2.12 叶绿素含量测定 | 第40页 |
2.2.13 脯氨酸测定 | 第40-41页 |
2.3 结果与分析 | 第41-54页 |
2.3.1 AteIF5A-2插入突变体的鉴定 | 第41-42页 |
2.3.2 AteIF5A-2的组织特异性表达 | 第42页 |
2.3.3 AteIF5A-2插入缺失突变体较Col-0对镉敏感性增强 | 第42-44页 |
2.3.4 植株镉及钙的含量 | 第44-47页 |
2.3.5 细胞壁镉含量 | 第47页 |
2.3.6 不同浓度镉处理对拟南芥叶绿素含量的影响 | 第47-49页 |
2.3.7 不同浓度镉处理对拟南芥总抗氧化能力及膜脂质过氧化的影响 | 第49-50页 |
2.3.8 镉对过氧化氢含量的影响 | 第50-52页 |
2.3.9 镉对脯氨酸含量的影响 | 第52页 |
2.3.10 镉处理对谷胱甘肽含量的影响 | 第52-54页 |
2.4 讨论 | 第54-57页 |
小结 | 第57-59页 |
第三章 不同浓度镉处理对fbr12及Col-0相关基因表达的影响 | 第59-76页 |
3.1 引言 | 第59-60页 |
3.2 材料和方法 | 第60-63页 |
3.2.1 植物材料和培养条件 | 第60页 |
3.2.2 实验方法 | 第60页 |
3.2.3 RNA提取 | 第60-61页 |
3.2.4 Real-time PCR | 第61-62页 |
3.2.5 数据分析 | 第62-63页 |
3.3 结果与分析 | 第63-70页 |
3.3.1 镉对活性氧产生和清除相关基因表达的影响 | 第63-67页 |
3.3.2 镉对ZIP1和IRT1表达的影响 | 第67页 |
3.3.3 镉对CAX2和AtNramp3表达的影响 | 第67页 |
3.3.4 镉对PCS1和PCS2表达的影响 | 第67-70页 |
3.4 讨论 | 第70-74页 |
小结 | 第74-76页 |
第四章 多基因超表达拟南芥对重金属累积的影响 | 第76-89页 |
4.1 引言 | 第76页 |
4.2 材料和方法 | 第76-83页 |
4.2.1 植物材料 | 第76-77页 |
4.2.2 菌株和载体 | 第77页 |
4.2.3 拟南芥基因组RNA的提取及反转录 | 第77页 |
4.2.4 PCR产物合成、纯化 | 第77页 |
4.2.5 BP反应 | 第77页 |
4.2.6 LR反应 | 第77页 |
4.2.7 大肠杆菌热击转化 | 第77-78页 |
4.2.8 单克隆菌落的培养和筛选 | 第78页 |
4.2.9 农杆菌真空浸润液法获得转基因拟南芥 | 第78页 |
4.2.10 Real-time PCR反应 | 第78页 |
4.2.11 多重循环Gateway LR重组 | 第78-83页 |
4.3 结果与分析 | 第83-86页 |
4.3.1 LR2-5和LR4-16的基因表达分析验证 | 第83页 |
4.3.2 转基因株系对镉的吸收和累积 | 第83-84页 |
4.3.3 转基因株系对铜的吸收和累积 | 第84-85页 |
4.3.4 转基因株系对锌的吸收和累积 | 第85-86页 |
4.4 讨论 | 第86-88页 |
小结 | 第88-89页 |
第五章 结论与展望 | 第89-91页 |
5.1 主要研究结论 | 第89页 |
5.2 展望 | 第89-91页 |
参考文献 | 第91-126页 |
附录:铝胁迫下荞麦根系差异表达蛋白的鉴定 | 第126-140页 |
5.1 引言 | 第126-127页 |
5.2 材料和方法 | 第127-131页 |
5.2.1 植物材料和培养方法 | 第127页 |
5.2.2 处理方法 | 第127页 |
5.2.3 蛋白提取 | 第127-128页 |
5.2.4 蛋白定量 | 第128页 |
5.2.5 第一向等电聚焦 | 第128-129页 |
5.2.6 胶条平衡 | 第129页 |
5.2.7 SDS-PAGE电泳 | 第129页 |
5.2.8 染色 | 第129-130页 |
5.2.9 图像采集和分析 | 第130页 |
5.2.10 蛋白质的质谱鉴定 | 第130-131页 |
5.3 结果与分析 | 第131-135页 |
5.3.1 荞麦根总蛋白表达谱分析 | 第131-135页 |
5.4 讨论 | 第135-137页 |
小结 | 第137-138页 |
参考文献 | 第138-140页 |
作者简历及攻读博士期间论文发表情况 | 第140-141页 |