摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-29页 |
1.1 前言 | 第13-15页 |
1.2 细胞的信号转导和信号传递系统 | 第15-18页 |
1.2.1 胞外刺激信号 | 第15-16页 |
1.2.2 跨膜信号转导 | 第16-18页 |
1.2.3 蛋白可逆性磷酸化在胞内信号转导中的作用 | 第18页 |
1.3 WSSV 感染触发的细胞内信号通路 | 第18-19页 |
1.3.1 Janus kinase (JAK)-(signal transducer and activator of transcription)STAT 信号通路 | 第18-19页 |
1.3.2 整合素信号通路 | 第19页 |
1.4 真核细胞质基质及细胞骨架 | 第19-21页 |
1.4.1 细胞质基质 | 第19-20页 |
1.4.2 细胞骨架 | 第20-21页 |
1.4.3 大分子物质在细胞内的转运 | 第21页 |
1.5 动力蛋白 | 第21-23页 |
1.5.1 轴丝动力蛋白 | 第21-22页 |
1.5.2 胞质动力蛋白 | 第22-23页 |
1.6 分子生物学技术在本论文中的应用 | 第23-28页 |
1.6.1 磷酸化特异性流式细胞术 | 第23-25页 |
1.6.2 实时荧光定量 PCR | 第25页 |
1.6.3 快速 cDNA 末端扩增技术(RACE) | 第25-27页 |
1.6.4 RNA 干扰 | 第27-28页 |
1.7 本论文研究的目的和意义 | 第28-29页 |
第二章 WSSV 感染后中国对虾血细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平的变化 | 第29-36页 |
2.1 对虾血细胞固定剂和通透剂的选择 | 第29-31页 |
2.1.1 实验材料与仪器 | 第29页 |
2.1.2 实验方法 | 第29-30页 |
2.1.3 实验结果 | 第30页 |
2.1.4 讨论 | 第30-31页 |
2.2 WSSV 感染后不同时间段中国对虾血细胞内酪氨酸磷酸化水平的流式检测 | 第31-35页 |
2.2.1 实验材料与仪器 | 第32页 |
2.2.2 实验方法 | 第32页 |
2.2.3 实验结果 | 第32-33页 |
2.2.4 讨论 | 第33-35页 |
小结 | 第35-36页 |
第三章 中国对虾血细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的定位、鉴定及其在 WSSV 感染后的基因表达量变化 | 第36-51页 |
3.1 中国对虾血细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的定位及其鉴定 | 第36-43页 |
3.1.1 实验材料与仪器 | 第36-38页 |
3.1.2 实验方法 | 第38-39页 |
3.1.3 实验结果 | 第39-42页 |
3.1.4 讨论 | 第42-43页 |
3.2 中国对虾组蛋白基因的克隆及其在 WSSV 感染后表达量的变化 | 第43-50页 |
3.2.1 实验材料与仪器 | 第43-44页 |
3.2.2 实验方法 | 第44-46页 |
3.2.3 实验结果 | 第46-49页 |
3.2.4 讨论 | 第49-50页 |
小结 | 第50-51页 |
第四章 中国对虾血细胞胞质动力蛋白中间链(FcDYNCI)基因的克隆及其序列分析 | 第51-64页 |
4.1 中国对虾血细胞胞质动力蛋白中间链(FcDYNCI)基因的克隆 | 第51-56页 |
4.1.1 实验材料与仪器 | 第51页 |
4.1.2 实验方法 | 第51-54页 |
4.1.3 实验结果 | 第54-55页 |
4.1.4 讨论 | 第55-56页 |
4.2 FcDYNCI 基因序列分析 | 第56-63页 |
4.2.1 实验方法 | 第56-57页 |
4.2.2 分析结果 | 第57-58页 |
4.2.3 讨论 | 第58-63页 |
小结 | 第63-64页 |
第五章 中国对虾 FcDYNCI 基因的表达差异研究 | 第64-70页 |
5.1 实验材料与仪器 | 第64页 |
5.2 实验方法 | 第64-67页 |
5.2.1 WSSV 的精提取 | 第64-65页 |
5.2.2 健康中国对虾组织取样及 WSSV 感染后中国对虾血细胞采集 | 第65-66页 |
5.2.3 实时荧光定量 PCR 检测 | 第66-67页 |
5.3 实验结果 | 第67-69页 |
5.3.1 FcDYNCI 基因的组织分布 | 第67-68页 |
5.3.2 WSSV 感染后中国对虾血细胞 FcDYNCI 基因表达量的变化 | 第68-69页 |
5.4 讨论 | 第69页 |
小结 | 第69-70页 |
第六章 兔抗 FcDYNCI 多克隆抗体的制备及 FcDYNCI 与 WSSV 在血细胞内的定位 | 第70-78页 |
6.1 实验材料与仪器 | 第70页 |
6.2 实验方法 | 第70-74页 |
6.2.1 FcDYNCI 重组蛋白的表达 | 第70-71页 |
6.2.2 FcDYNCI 重组蛋白的纯化 | 第71-72页 |
6.2.3 兔抗 FcDYNCI 多抗及鼠抗 VP28 单抗的制备 | 第72-73页 |
6.2.4 FcDYNCI 与 WSSV 在中国对虾血细胞内的定位 | 第73-74页 |
6.3 实验结果 | 第74-77页 |
6.3.1 FcDYNCI 重组质粒转化 BL21 后的菌落 PCR 检测 | 第74页 |
6.3.2 FcDYNCI 重组蛋白的表达、纯化及兔抗 FcDYNCI 多抗的活性验证 | 第74-76页 |
6.3.3 FcDYNCI 与 WSSV 在中国对虾血细胞内的共定位 | 第76-77页 |
6.4 讨论 | 第77页 |
小结 | 第77-78页 |
第七章 中国对虾 FcDYNCI 基因的 RNA 干扰及其对 WSSV 复制的影响 | 第78-85页 |
7.1 实验材料与仪器 | 第78页 |
7.2 实验方法 | 第78-81页 |
7.2.1 双链 RNA(dsRNA)的合成 | 第78-80页 |
7.2.2 中国对虾体内 FcDYNCI 基因沉默(RNAi)及其效果检测 | 第80页 |
7.2.3 FcDYNCI 基因沉默后对对虾血细胞内 WSSV 复制的影响 | 第80-81页 |
7.3 实验结果 | 第81-83页 |
7.3.1 FcDYNCI dsRNA 的合成 | 第81页 |
7.3.2 RNAi 后对虾血细胞内 FcDYNCI 基因表达量和 FcDYNCI 蛋白量的变化 | 第81-83页 |
7.3.3 RNAi 后对虾血细胞内 WSSV 基因表达量的变化 | 第83页 |
7.4 讨论 | 第83-84页 |
小结 | 第84-85页 |
第八章 中国对虾 FcDYNCI 与 Rab 7 的相互作用研究 | 第85-91页 |
8.1 实验材料与仪器 | 第85-86页 |
8.2 实验方法 | 第86-87页 |
8.2.1 FcDYNCI 相互作用蛋白的预测 | 第86页 |
8.2.2 中国对虾血细胞总蛋白的提取 | 第86页 |
8.2.3 免疫共沉淀实验验证 Rab 7 与 FcDYNCI 的相互作用 | 第86页 |
8.2.4 Rab 7 相互作用蛋白的质谱鉴定 | 第86-87页 |
8.3 实验结果 | 第87-89页 |
8.3.1 FcDYNCI 相互作用蛋白 | 第87-88页 |
8.3.2 FcDYNCI 与 Rab 7 相互作用关系的验证 | 第88-89页 |
8.3.3 中国对虾血细胞内 Rab 7 相互作用蛋白的质谱鉴定 | 第89页 |
8.4 讨论 | 第89-90页 |
小结 | 第90-91页 |
总结 | 第91-93页 |
参考文献 | 第93-102页 |
致谢 | 第102-103页 |
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第103-104页 |