| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 0 前言 | 第15-32页 |
| 0.1 参与 WSSV 感染的对虾分子 | 第15-20页 |
| 0.1.1 对虾免疫相关分子 | 第15-17页 |
| 0.1.2 WSSV结合蛋白 | 第17-20页 |
| 0.1.3 其他参与WSSV感染的分子 | 第20页 |
| 0.2 蛋白质组学 | 第20-25页 |
| 0.2.1 蛋白质组学的概念及研究内容 | 第20-21页 |
| 0.2.2 蛋白质组学的研究技术 | 第21-23页 |
| 0.2.3 蛋白质组学技术在对虾病毒病中的应用 | 第23-25页 |
| 0.3 SUMO 化研究进展 | 第25-28页 |
| 0.3.1 SUMO化简介 | 第25-26页 |
| 0.3.2 SUMO化修饰在病毒感染中的作用 | 第26-28页 |
| 0.4 丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶研究进展 | 第28-32页 |
| 0.4.1 蛋白磷酸酶1 | 第29-30页 |
| 0.4.2 蛋白磷酸酶2A | 第30-32页 |
| 1 中国对虾感染 WSSV 后血细胞差异表达蛋白质的鉴定 | 第32-49页 |
| 1.1 实验材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1.2 WSSV感染实验 | 第33-34页 |
| 1.1.3 血细胞总蛋白的制备 | 第34页 |
| 1.1.4 双向电泳 | 第34-35页 |
| 1.1.5 凝胶染色及图像扫描与分析 | 第35-36页 |
| 1.1.6 质谱分析与GO功能分类 | 第36页 |
| 1.1.7 RNA提取和cDNA第一链合成 | 第36-37页 |
| 1.1.8 实时荧光定量PCR实验 | 第37-38页 |
| 1.2 实验结果 | 第38-44页 |
| 1.2.1 WSSV对中国对虾感染的巢式PCR检测 | 第38-39页 |
| 1.2.2 中国对虾血细胞差异表达蛋白质的双向电泳分析 | 第39-40页 |
| 1.2.3 差异表达蛋白质的质谱鉴定和功能分类 | 第40-44页 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR对蛋白组学结果的验证 | 第44页 |
| 1.3 讨论 | 第44-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 2 中国对虾 SUMO 和 SUMO E2 结合酶 UBC9 的基因克隆与表达分析 | 第49-62页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第49-54页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 2.1.2 FcSUMO和FcUBC9核心片段的获得 | 第50-51页 |
| 2.1.3 3’RACE和5’RACE | 第51-52页 |
| 2.1.4 cDNA全长的获得及验证 | 第52页 |
| 2.1.5 FcSUMO和FcUBC9的生物信息学分析 | 第52页 |
| 2.1.6 FcSUMO和FcUBC9 mRNA的组织分布情况检测 | 第52页 |
| 2.1.7 WSSV感染后FcSUMO和FcUBC9的表达变化情况检测 | 第52-54页 |
| 2.2 实验结果 | 第54-60页 |
| 2.2.1 FcSUMO和FcUBC9核心序列和两端序列的获得 | 第54-55页 |
| 2.2.2 FcSUMO和FcUBC9 cDNA全长序列分析 | 第55-56页 |
| 2.2.3 FcSUMO和FcUBC9 与其他物种的同源性分析 | 第56-59页 |
| 2.2.4 FcSUMO和FcUBC9 mRNA在各组织中的表达 | 第59页 |
| 2.2.5 WSSV感染后对虾血细胞和性腺中FcSUMO和FcUBC9的表达变 | 第59-60页 |
| 2.3 讨论 | 第60-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 3 中国对虾 SUMO ORF 和 UBC9 ORF 的原核表达及多克隆抗体制备及应用 | 第62-74页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第62-70页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 3.1.2 FcSUMO ORF和FcUBC9 ORF的原核表达 | 第63-66页 |
| 3.1.3 重组蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| 3.1.4 多克隆抗体的制备与效价测定 | 第67-68页 |
| 3.1.5 免疫印迹法鉴定重组蛋白与多抗的结合 | 第68-69页 |
| 3.1.6 免疫印迹法鉴定中国对虾血细胞中的SUMO和UBC蛋白 | 第69页 |
| 3.1.7 间接免疫荧光实验 | 第69-70页 |
| 3.2 实验结果 | 第70-72页 |
| 3.2.1 FcSUMO ORF和FcUBC9 ORF的原核表达与纯化 | 第70页 |
| 3.2.2 重组蛋白与多抗结合的免疫印迹法鉴定 | 第70-71页 |
| 3.2.3 中国对虾血细胞中SUMO和UBC蛋白的免疫印迹法鉴定 | 第71-72页 |
| 3.2.4 间接免疫荧光实验 | 第72页 |
| 3.3 讨论 | 第72-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 4 RNA 干扰实验分析 SUMO 和 UBC9 在病毒感染中的作用 | 第74-81页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第74-77页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第74页 |
| 4.1.2 SUMO和UBC9 RNA干扰用引物的设计 | 第74-75页 |
| 4.1.3 dsSUMO和dsUBC9的合成 | 第75页 |
| 4.1.4 dsSUMO和dsUBC9干扰效率的测定 | 第75页 |
| 4.1.5 注射dsSUMO或dsUBC9对WSSV感染的影响 | 第75-77页 |
| 4.2 实验结果 | 第77-80页 |
| 4.2.1 SUMO和UBC9的干扰效率 | 第77-78页 |
| 4.2.2 注射dsRNA对对虾死亡率的影响 | 第78页 |
| 4.2.3 注射dsRNA对血细胞中病毒拷贝数和病毒基因表达量的影响 | 第78-80页 |
| 4.3 讨论 | 第80页 |
| 小结 | 第80-81页 |
| 5 中国对虾蛋白磷酸酶 1 催化亚基β的基因克隆及原核表达 | 第81-92页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第81-84页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第81页 |
| 5.1.2 FcPP1β核心片段的获得 | 第81-82页 |
| 5.1.3 3’RACE和5’RACE | 第82页 |
| 5.1.4 cDNA全长的获得及验证 | 第82页 |
| 5.1.5 FcPP1β的生物信息学分析 | 第82页 |
| 5.1.6 FcPP1β mRNA的组织分布情况检测 | 第82页 |
| 5.1.7 WSSV感染后FcPP1β的表达变化情况检测 | 第82-83页 |
| 5.1.8 FcPP1β ORF的原核表达与重组蛋白纯化 | 第83-84页 |
| 5.2 实验结果 | 第84-90页 |
| 5.2.1 FcPP1β核心序列和两端序列的获得 | 第84-85页 |
| 5.2.2 FcPP1β cDNA全长序列分析 | 第85-86页 |
| 5.2.3 FcPP1β与其他物种的同源性分析 | 第86-88页 |
| 5.2.4 FcPP1β mRNA在各组织中的表达 | 第88-89页 |
| 5.2.5 WSSV感染后中国对虾血细胞和性腺中FcPP1β的表达变化 | 第89页 |
| 5.2.6 FcPP1β ORF的原核表达与重组蛋白纯化 | 第89-90页 |
| 5.3 讨论 | 第90-91页 |
| 小结 | 第91-92页 |
| 总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 个人简历、在校期间发表的学术成果 | 第104-105页 |
