| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 本论文的创新之处 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-44页 |
| 1.1 前言 | 第16-21页 |
| 1.2 砷甲基化机制 | 第21-25页 |
| 1.3 甲基转移机制 | 第25-26页 |
| 1.4 SAM在甲基化酶中的结合区域 | 第26-30页 |
| 1.5 砷在砷甲基化酶中的结合位点 | 第30-33页 |
| 1.6 蛋白质同源建模 | 第33-35页 |
| 1.7 论文设想和研究内容 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 第二章 人砷甲基化酶中Asp76、Asp84、Asp102和Asp150残基功能的分析 | 第44-71页 |
| 2.1 引言 | 第44页 |
| 2.2 实验部分 | 第44-53页 |
| 2.2.1 仪器及主要试剂 | 第44-46页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第53-68页 |
| 2.3.1 hAS3MT突变体基因的扩增 | 第53-54页 |
| 2.3.2 PCR产物克隆 | 第54-55页 |
| 2.3.3 重组表达质粒pET32α-AS3MT-D102N的酶切鉴定 | 第55页 |
| 2.3.4 HPLC-ICP-MS分析砷化合物 | 第55-56页 |
| 2.3.5 hAS3MT突变体的催化活性 | 第56-59页 |
| 2.3.6 荧光光谱测定SAM与hAS3MT突变体的解离常数 | 第59-60页 |
| 2.3.7 WT-hAS3MT及其突变体的二级结构 | 第60-63页 |
| 2.3.8 WT-hAS3MT-SAM以及hAS3MT突变体-SAM的模型 | 第63-68页 |
| 2.4 结论 | 第68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第三章 人砷甲基化酶中距S-腺苷甲硫氨酸5A范围内的氨基酸功能的分析 | 第71-93页 |
| 3.1 引言 | 第71页 |
| 3.2 实验部分 | 第71-75页 |
| 3.2.1 仪器及主要试剂 | 第71-72页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第72-75页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第75-90页 |
| 3.3.1 hAS3MT突变体的催化活性 | 第75-80页 |
| 3.3.2 WT-hAS3MT及其突变体的二级结构 | 第80-85页 |
| 3.3.3 hAS3MT突变体-SAM的模型 | 第85-88页 |
| 3.3.4 hAS3MT中距SAM 5 A范围内的氨基酸作用的分析 | 第88-90页 |
| 3.4 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第四章 人砷甲基化酶与砷的第三个结合位点的研究 | 第93-115页 |
| 4.1 前言 | 第93页 |
| 4.2 实验部分 | 第93-99页 |
| 4.2.1 仪器及主要试剂 | 第93-94页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第94-99页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第99-110页 |
| 4.3.1 不同物种AS3MT的序列比对 | 第100页 |
| 4.3.2 hAS3MT突变体的纯化 | 第100页 |
| 4.3.3 hAS3MT突变体的催化活性 | 第100-104页 |
| 4.3.4 C32S、C61S、C156S和C206S催化iAs~(Ⅲ)和MMA~(Ⅲ)甲基化的能力 | 第104-105页 |
| 4.3.5 C32S、C61S和C85S的二级结构 | 第105-108页 |
| 4.3.6 WT-hAS3MT-SAM-As模型 | 第108-109页 |
| 4.3.7 甲基转移机理的推测 | 第109-110页 |
| 4.4 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-115页 |
| 总结 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
