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草酸氧化酶基因(OxO)遗传转化拟南芥及其抗病机理的初步分析

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
1 引言第12-22页
    1.1 文献综述第12-19页
        1.1.1 草酸对植物的毒害作用机理第12-13页
        1.1.2 草酸氧化酶的研究进展第13-14页
        1.1.3 草酸氧化酶的抗病机理第14-16页
        1.1.4 草酸氧化酶在植物其它抗逆作用的研究进展第16页
        1.1.5 抗氧化酶在植物抗逆中的作用第16-18页
        1.1.6 脯氨酸和糖类在植物防御过程中的作用机制第18-19页
    1.2 本研究的目的意义以及技术路线第19-22页
2 农杆菌介导的花器官原位转化法的条件优化第22-34页
    2.1 材料和方法第22-25页
        2.1.1 植物以及种植方法第22页
        2.1.2 农杆菌的培养及渗透培养基的制备第22-23页
        2.1.3 花器官原位转化浸染时间对拟南芥花序存活状态的影响第23-24页
        2.1.4 花器官原位转化法转化拟南芥的花蕾状态的研究第24-25页
        2.1.5 Floral-dip 法与 Drop-by-drop 法转化处理拟南芥第25页
    2.2 结果与分析第25-31页
        2.2.1 农杆菌生长阶段对转化率的影响第25-28页
        2.2.2 渗透培养基的农杆菌浓度对拟南芥转化率的影响第28-31页
        2.2.3 Floral-dip 转化法的浸染时间对拟南芥花序存活状态的影响第31页
        2.2.4 Floral-dip 转化法转化拟南芥的花蕾的最佳状态第31页
    2.3 小结与讨论第31-34页
        2.3.1 农杆菌菌悬液与渗透培养基中农杆菌浓度对转化率的影响第31-32页
        2.3.2 浸染时间对拟南芥花序存活状态的影响第32-33页
        2.3.3 拟南芥的花蕾的最佳状态第33-34页
3 转 OxO 基因拟南芥的获得第34-43页
    3.1 材料与方法第34-38页
        3.1.1 草丁磷选择培养基初步筛选拟南芥抗性植株第34-35页
            3.1.1.1 选择 PPT 筛选浓度第34页
            3.1.1.2 PPT 选择培养基筛选转基因拟南芥第34-35页
        3.1.2 GUS 组织化学染色法鉴定转基因拟南芥植株第35页
        3.1.3 PCR 验证转基因拟南芥植株第35-37页
            3.1.3.1 CTAB 法提取拟南芥基因组 DNA第35-36页
            3.1.3.2 转基因拟南芥植株的 PCR 检测第36-37页
        3.1.4 RT-PCR 检测转 OxO 拟南芥的目的基因的表达第37-38页
    3.2 结果与分析第38-42页
        3.2.1 PPT 选择培养基初筛阳性苗第38-40页
        3.2.2 GUS 组织化学染色法检测 PPT 抗性植株第40-41页
        3.2.3 PCR 验证 GUS 表达植株第41页
        3.2.4 RT-PCR 验证 OxO 基因的表达第41-42页
    3.3 小结与讨论第42-43页
4 转 OxO 拟南芥的抗病分析及抗病机理的初步研究第43-62页
    4.1 转 OxO 拟南芥的抗病分析第43-48页
        4.1.1 材料与方法第43-45页
            4.1.1.1 草酸鉴定法检测转 OxO 基因拟南芥的抗菌核病性第43-44页
            4.1.1.2 菌丝体接种法检测转 OxO 基因拟南芥的抗菌核病性第44-45页
        4.1.2 结果与分析第45-46页
            4.1.2.1 草酸鉴定法检测转 OxO 基因拟南芥的抗病性第45-46页
            4.1.2.2 菌丝体接种法鉴定转 OxO 拟南芥的抗病性第46页
        4.1.3 小结与讨论第46-48页
    4.2 转 OxO 拟南芥的抗氧化分析第48-56页
        4.2.1 材料与方法第48-51页
            4.2.1.1 二氨基联苯胺(DAB)法检测转 OxO 拟南芥的 H2O2的含量第48页
            4.2.1.2 抗氧化酶活性的测定第48-51页
        4.2.2 结果与分析第51-53页
            4.2.2.1 转 OxO 拟南芥叶片在菌核病感染后积累更多 H2O2含量第51-52页
            4.2.2.2 抗氧化酶的活性变化显著第52-53页
        4.2.3 小结与讨论第53-56页
    4.3 转 OxO 拟南芥的渗透调节物质的分析第56-60页
        4.3.1 材料与方法第56-58页
            4.3.1.1 可溶性糖含量的检测第56-57页
            4.3.1.2 脯氨酸含量的检测第57-58页
        4.3.2 结果与分析第58-60页
            4.3.2.1 转 OxO 拟南芥的可溶糖含量相对于野生型拟南芥增加更多第58-59页
            4.3.2.2 菌核病菌丝体接种后转 OxO 拟南芥脯氨酸含量更高第59-60页
    4.4 小结与讨论第60-62页
5 结论与展望第62-65页
附录1第65-66页
附录2第66-67页
参考文献第67-77页
致谢第77-78页
个人简历及攻读硕士期间发表论文第78页

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