| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 谷胱甘肽过氧化物酶 | 第14-19页 |
| 1.1.1 含硒蛋白质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 含硒 GPx | 第15-18页 |
| 1.1.3 GPx7 | 第18-19页 |
| 1.2 活性氧和肿瘤及骨髓损伤的关系 | 第19-22页 |
| 1.2.1 H_2O_2及其生理功能 | 第19-20页 |
| 1.2.2 ROS 与肿瘤的关系 | 第20-21页 |
| 1.2.3 ROS 与骨髓损伤的关系 | 第21-22页 |
| 1.3 GPx 的抗氧化机制 | 第22-24页 |
| 1.4 立题依据和研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 人源 GPx7 载体的构建和表达 | 第26-35页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验器材 | 第26-27页 |
| 2.1.2 试剂和酶 | 第27页 |
| 2.1.3 引物和质粒 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 人源 GPx7 目的基因的 PCR 反应 | 第28页 |
| 2.2.2 限制性酶切反应和产物回收 | 第28页 |
| 2.2.3 表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.4 E.coli DH5α与 BL21 (DE3) 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5 感受态细胞的质粒转化 | 第29页 |
| 2.2.6 阳性转化子的 PCR 检测 | 第29页 |
| 2.2.7 限制性酶切反应鉴定阳性转化子 | 第29-30页 |
| 2.2.8 质粒抽提纯化 | 第30页 |
| 2.2.9 菌株保存 | 第30页 |
| 2.2.10 乳糖诱导表达 GPx7 | 第30-31页 |
| 2.2.11 重组蛋白 GPx7 表达鉴定 | 第31页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第31-34页 |
| 2.3.1 GPx7 基因的扩增与重组质粒构建 | 第31-32页 |
| 2.3.2 重组质粒转化宿主菌 | 第32-33页 |
| 2.3.3 GPx7 的原核表达 | 第33-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 GPx7 的纯化与鉴定 | 第35-48页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.2 化学试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 蛋白纯化柱子与填料介质 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 GPx7 重组蛋白的提取和纯化 | 第36-39页 |
| 3.2.2 GPx7 抗体制备 | 第39页 |
| 3.2.3 Western blotting | 第39页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第39-47页 |
| 3.3.1 阳离子交换层析捕获 GPx7 | 第39-46页 |
| 3.3.2 分子排阻层析精制 GPx7 | 第46-47页 |
| 3.3.3 GPx7 的 Western blotting 鉴定 | 第47页 |
| 3.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 GPx7 抗肿瘤活性及其对骨髓损伤的修复作用 | 第48-61页 |
| 4.1 实验仪器与材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第49页 |
| 4.1.2 材料与试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 实验动物、细胞与真核表达质粒 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 A549 细胞的计数 | 第50页 |
| 4.2.2 A549 细胞的转染 | 第50页 |
| 4.2.3 A549 细胞生长曲线的测定 | 第50页 |
| 4.2.4 S180 荷瘤小鼠模型建立 | 第50-51页 |
| 4.2.5 GPx7 的体内抑瘤实验 | 第51页 |
| 4.2.6 小鼠骨髓损伤模型的建立和 GPx7 蛋白注射 | 第51页 |
| 4.2.7 外周血白细胞和血小板分析 | 第51页 |
| 4.2.8 骨髓细胞计数 | 第51-52页 |
| 4.2.9 GPx7 的酶活性检测 | 第52页 |
| 4.2.10 A549 细胞 ROS 浓度的测定 | 第52页 |
| 4.2.11 数据统计分析 | 第52页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第52-60页 |
| 4.3.1 GPx7 体外 (in vitro) 对 A549 肿瘤细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.2 GPx7 体内 (in vivo) 对 S180 肿瘤生长的影响 | 第53-55页 |
| 4.3.3 GPx7 对化疗小鼠骨髓细胞的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.4 GPx7 对化疗小鼠外周血白细胞和血小板的影响 | 第56-58页 |
| 4.3.5 GPx7 的 GPx 酶活性检测 | 第58-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 全文总结与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 （溶液配制） | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第70页 |
