| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 黑曲霉 | 第11-14页 |
| 1.1.1 黑曲霉简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 黑曲霉的工业应用 | 第12-14页 |
| 1.1.2.1 黑曲霉在柠檬酸生产中的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.2.2 黑曲霉表达系统以及酶制剂生产中的应用 | 第13页 |
| 1.1.2.3 黑曲霉在冶金领域的应用 | 第13页 |
| 1.1.2.4 黑曲霉在养殖业上的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 耐酸性α-淀粉酶 | 第14-21页 |
| 1.2.1 耐酸性α-淀粉酶的来源 | 第14页 |
| 1.2.2 耐酸性α-淀粉酶的催化机制 | 第14-15页 |
| 1.2.3 α-淀粉酶的特性及作用机制 | 第15-17页 |
| 1.2.4 耐酸性α-淀粉酶的耐酸机制及耐热性 | 第17页 |
| 1.2.5 α-淀粉酶的酶活测定方法 | 第17-18页 |
| 1.2.6 耐酸性α-淀粉酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.7 耐酸性α-淀粉酶的异源表达 | 第20页 |
| 1.2.8 耐酸性α-淀粉酶的开发和应用概况 | 第20-21页 |
| 1.3 甘露聚糖酶 | 第21-23页 |
| 1.3.1 β-甘露聚糖酶的来源 | 第21页 |
| 1.3.2 β-甘露聚糖酶的酶学性质 | 第21-22页 |
| 1.3.3 β-甘露聚糖酶的异源表达 | 第22页 |
| 1.3.4 国内外研究进展 | 第22页 |
| 1.3.5 β-甘露聚糖酶的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统[95] | 第23-25页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统研究现状 | 第23-24页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统的优点 | 第24-25页 |
| 1.4.3 影响外源基因在巴斯德毕赤酵母表达的因素 | 第25页 |
| 1.4.4 巴斯德毕赤酵母表达系统的应用 | 第25页 |
| 1.5 真菌ITS序列分析与Biolog微生物鉴定系统 | 第25-26页 |
| 1.6 研究内容、目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 嗜酸性霉菌MJ5的鉴定、碳源分析及所产α淀粉酶的酶学性质 | 第27-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株和试剂 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 引物合成及测序 | 第28页 |
| 2.3 实验仪器 | 第28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.4.1 菌株的分离、纯化与保存 | 第28页 |
| 2.4.2 菌体的形态学观察 | 第28页 |
| 2.4.3 rDNAITS序列以及进化树的构建 | 第28-30页 |
| 2.4.4 Biolog微生物鉴定系统 | 第30页 |
| 2.4.5 在不同培养基下MJ5的产酸情况 | 第30页 |
| 2.4.6 MJ5淀粉酶性质的研究 | 第30-32页 |
| 2.4.6.1 淀粉酶酶活标准曲线的测定 | 第30-31页 |
| 2.4.6.2 淀粉酶的酶活力测定 | 第31页 |
| 2.4.6.3 MJ5淀粉酶产酶曲线的绘制 | 第31页 |
| 2.4.6.3 MJ5胞外淀粉酶的最适反应温度 | 第31页 |
| 2.4.6.4 MJ5胞外淀粉酶最适反应pH | 第31-32页 |
| 2.4.6.5 MJ5胞外淀粉酶pH稳定性和温度稳定性的测定 | 第32页 |
| 2.5 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.5.1 MJ5的形态特征观察 | 第32-33页 |
| 2.5.2 rDNAITS序列鉴定结果 | 第33-34页 |
| 2.5.3 碳源代谢分析 | 第34-36页 |
| 2.5.4 不同培养基下的产酸情况 | 第36-37页 |
| 2.5.5 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第37页 |
| 2.5.6 MJ5淀粉酶的产酶曲线 | 第37-38页 |
| 2.5.7 MJ5淀粉酶的最适温度 | 第38-39页 |
| 2.5.8 MJ5淀粉酶的最适pH | 第39-40页 |
| 2.5.9 MJ5淀粉酶pH稳定性 | 第40页 |
| 2.5.10 MJ5淀粉酶的热稳定性 | 第40-41页 |
| 2.6 讨论 | 第41页 |
| 2.7 小结 | 第41-44页 |
| 第三章 黑曲霉MJ5(AspergillusnigerMJ5)耐酸性α-淀粉酶基因的克隆与表达 | 第44-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 菌株、载体、工具酶和试剂 | 第44页 |
| 3.1.2 引物合成及测序 | 第44页 |
| 3.1.3 培养基及试剂的配制 | 第44-45页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 黑曲霉MJ5全基因组测序 | 第45页 |
| 3.2.2 耐酸性α-淀粉酶基因的克隆 | 第45-48页 |
| 3.2.3 耐酸性α-淀粉酶基因cDNA全长序列 | 第48-49页 |
| 3.2.4 耐酸性α-淀粉酶在毕赤酵母中的表达 | 第49-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-59页 |
| 3.3.1 黑曲霉MJ5全基因组测序结果 | 第51-52页 |
| 3.3.2 AspergillusnigerMJ5耐酸性α-淀粉酶基因α-amy-5的扩增 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组表达载体的构建与阳性克隆菌落的鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.3.4 耐酸性α-淀粉酶基因α-amy-5基因序列分析 | 第54-56页 |
| 3.3.5 耐酸性α-淀粉酶基因编码蛋白序列的糖基化分析 | 第56-57页 |
| 3.3.6 耐酸性α-淀粉酶基因基因所编码蛋白的等电点和分子量预测 | 第57-58页 |
| 3.3.7 重组质粒的线性化与α-amy-5重组菌株的筛选 | 第58页 |
| 3.3.8 重组淀粉酶酶活测定结果 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59页 |
| 3.5 小结 | 第59-62页 |
| 第四章 黑曲霉MJ5(AspergillusnigerMJ5)甘露聚糖酶基因的克隆与表达 | 第62-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第62页 |
| 4.1.1 菌株、载体、工具酶和试剂 | 第62页 |
| 4.1.2 引物合成及测序 | 第62页 |
| 4.1.3 培养基及试剂的配制 | 第62页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-68页 |
| 4.2.1 MJ5甘露聚糖酶基因的克隆 | 第62-64页 |
| 4.2.2 甘露聚糖酶基因cDNA全长序列 | 第64-65页 |
| 4.2.3 MJ5甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第65-66页 |
| 4.2.4 重组甘露聚糖酶的酶学性质测定 | 第66-68页 |
| 4.2.4.1 甘露聚糖酶酶活标准曲线的测定 | 第66页 |
| 4.2.4.2 甘露聚糖酶的酶活力以及比活力的测定 | 第66-67页 |
| 4.2.4.3 MJ5甘露聚糖酶的最适反应温度 | 第67-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-78页 |
| 4.3.1 AspergillusnigerMJ5甘露聚糖酶基因man-5的扩增 | 第68页 |
| 4.3.2 重组表达载体的构建与阳性克隆菌落的鉴定结果 | 第68-69页 |
| 4.3.3 MJ5甘露聚糖酶基因man-5基因序列分析 | 第69-71页 |
| 4.3.4 MJ5甘露聚糖酶基因编码蛋白序列的糖基化分析 | 第71页 |
| 4.3.5 MJ5甘露聚糖酶基因基因所编码蛋白的等电点和分子量预测 | 第71-72页 |
| 4.3.6 重组质粒的线性化与man-5重组菌株的筛选 | 第72-73页 |
| 4.3.7 MJ5甘露聚糖酶man-5的纯化及脱糖基化 | 第73-74页 |
| 4.3.8 MJ5甘露聚糖酶man-5的酶学性质分析 | 第74-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78页 |
| 4.5 小结 | 第78-80页 |
| 第五章 结论与展望 | 第80-82页 |
| 5.1 结论 | 第80-81页 |
| 5.2 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 | 第91-92页 |
