| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第11-23页 |
| 1.1 极端微生物 | 第11页 |
| 1.1.1 嗜热微生物 | 第11页 |
| 1.1.2 嗜冷微生物 | 第11页 |
| 1.2 热泉环境中嗜热微生物的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 热泉环境中高温酶 | 第12-13页 |
| 1.3.1 高温蛋白酶研究概述 | 第12-13页 |
| 1.4 蛋白酶的分类与命名 | 第13-16页 |
| 1.4.1 丝氨酸蛋白酶 | 第13-14页 |
| 1.4.2 金属蛋白酶 | 第14页 |
| 1.4.3 天门冬氨酸蛋白酶 | 第14-15页 |
| 1.4.4 半胱氨酸蛋白酶 | 第15-16页 |
| 1.5 高温蛋白酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.5.1 高温蛋白酶的来源 | 第16页 |
| 1.5.2 影响嗜热酶稳定性的因素 | 第16-17页 |
| 1.5.3 构想的刚性与柔性 | 第17页 |
| 1.6 蛋白酶基因的克隆与表达 | 第17-20页 |
| 1.6.1 大肠杆菌表达系统 | 第18页 |
| 1.6.2 芽孢杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| 1.6.3 酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.6.4 丝状真菌表达系统 | 第20页 |
| 1.7 高温蛋白酶的功能和应用 | 第20-21页 |
| 1.7.1 高温蛋白酶在工业生产中的应用 | 第20-21页 |
| 1.8 产蛋白酶菌株的选育 | 第21-22页 |
| 1.8.1 诱变选育 | 第21页 |
| 1.8.2 原生质体融合育种 | 第21-22页 |
| 1.8.3 基因工程育种 | 第22页 |
| 1.9 研究目的意义和研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 产蛋白酶菌的分离、鉴定及生长条件 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 Biolog微孔板与主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 主要培养基 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 产胞外蛋白酶的菌株的初筛选与分离纯化 | 第23页 |
| 2.2.2 产胞外蛋白酶菌株的复筛 | 第23-24页 |
| 2.2.3 酪氨酸标准曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.2.4 AWCD值的计算 | 第24页 |
| 2.2.5 细菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3 菌株的生长特性 | 第25页 |
| 2.3.1 碳源对菌株生长的影响 | 第25页 |
| 2.3.2 氮源对菌株生长的影响 | 第25页 |
| 2.3.3 不同温度对菌株的影响 | 第25页 |
| 2.3.4 pH值对菌株的影响 | 第25页 |
| 2.3.5 通过最适生长条件确定生长曲线 | 第25页 |
| 2.4 菌株种属的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.5 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.5.1 通过对BiologGenⅢ微孔板的碳源筛选菌株 | 第26页 |
| 2.5.2 产蛋白酶菌株的筛选 | 第26-27页 |
| 2.5.3 酪氨酸标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| 2.5.4 菌株的种属鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5.5 探究碳源、氮源、温度及pH对菌株生长情况的影响 | 第29-31页 |
| 2.5.6 菌株的生长曲线测定 | 第31-32页 |
| 2.6 讨论与小结 | 第32-33页 |
| 第三章 产高温蛋白酶菌株酶学特性及产酶条件分析 | 第33-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 粗酶液的制备 | 第33页 |
| 3.2.2 蛋白酶酶学性质的分析 | 第33页 |
| 3.2.3 菌株产酶的单因素试验 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.3.1 pH值对蛋白酶活性的影响 | 第34页 |
| 3.3.2 温度对蛋白酶活性的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.3 蛋白酶的热稳定性探究 | 第35-36页 |
| 3.3.4 pH值对蛋白酶稳定性的影响 | 第36页 |
| 3.4 酶活性质影响结论 | 第36-37页 |
| 3.5 蛋白酶菌株发酵产酶条件的研究 | 第37-38页 |
| 3.5.1 不同接种量对产酶的影响 | 第37页 |
| 3.5.2 发酵时间对产酶的影响 | 第37页 |
| 3.5.3 起始pH值对发酵培养基产酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.6 发酵培养条件小结 | 第38-39页 |
| 第四章 蛋白酶基因的克隆与表达分析 | 第39-47页 |
| 4.1 蛋白酶基因在大肠杆菌中表达 | 第39-40页 |
| 4.1.1 菌株、载体、工具酶与试剂 | 第39页 |
| 4.1.2 溶液 | 第39页 |
| 4.1.3 培养基 | 第39页 |
| 4.1.4 引物合成与DNA测序 | 第39页 |
| 4.1.5 实验所用仪器 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 蛋白酶基因spr的克隆 | 第40页 |
| 4.2.2 基因表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 4.2.3 蛋白酶基因的原核表达 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 4.3.1 蛋白酶基因的克隆 | 第42-45页 |
| 4.3.2 pET-28a表达载体的验证 | 第45-46页 |
| 4.3.3 阳性克隆子的筛选 | 第46页 |
| 4.3.4 菌株的诱导表达 | 第46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中表达 | 第47-54页 |
| 5.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 5.1.1 菌株、载体、酶和试剂 | 第47页 |
| 5.1.2 实验所需的溶液 | 第47页 |
| 5.1.3 培养基 | 第47页 |
| 5.1.4 引物的合成及DNA测序 | 第47页 |
| 5.1.5 实验所用仪器 | 第47-48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 蛋白酶重组质粒的构建 | 第48页 |
| 5.2.2 枯草芽孢杆菌表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 5.2.3 蛋白酶基因的表达 | 第49-50页 |
| 5.3 实验结果 | 第50-51页 |
| 5.3.1 蛋白酶基因的扩增 | 第50页 |
| 5.3.2 枯草芽孢杆菌表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 5.4 蛋白酶基因的表达与鉴定 | 第51-52页 |
| 5.5 讨论与小结 | 第52-54页 |
| 第六章 重组蛋白酶的酶学性质 | 第54-62页 |
| 6.1 实验材料 | 第54页 |
| 6.1.1 菌株 | 第54页 |
| 6.1.2 试剂 | 第54页 |
| 6.1.3 培养基 | 第54页 |
| 6.1.4 实验仪器 | 第54页 |
| 6.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 6.2.1 SCK6-spr的表达与纯化 | 第54页 |
| 6.2.2 蛋白质定量 | 第54-55页 |
| 6.2.3 以酪蛋白为底物测定SCK6-spr的酶学性质 | 第55页 |
| 6.3 结果 | 第55-61页 |
| 6.3.1 重组表达酶SCK6-spr的纯化 | 第55-56页 |
| 6.3.2 蛋白质的定量 | 第56-57页 |
| 6.3.3 SCK6-spr的最适pH值 | 第57页 |
| 6.3.4 SCK6-spr的最适温度 | 第57-58页 |
| 6.3.5 SCK6-spr的pH稳定性 | 第58-59页 |
| 6.3.6 SCK6-spr的热稳定性 | 第59-60页 |
| 6.3.7 SCK6-spr的动力学分析 | 第60-61页 |
| 6.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第七章 全文总结 | 第62-64页 |
| 7.1 结论 | 第62-63页 |
| 7.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
