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中国野生葡萄抗白粉病转录组及两个重要抗病相关基因功能分析

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-10页
第一章 文献综述第15-27页
    1.1 植物抗病机制研究进展第15-21页
        1.1.1 细胞外的病原体识别机制,相关分子模式第15-18页
        1.1.2 细胞内的效应蛋白识别机制第18-19页
        1.1.3 信号转导及下游响应基因第19-21页
    1.2 Lec RK研究进展第21-22页
    1.3 BAK1研究进展第22-23页
    1.4 葡萄与葡萄抗白粉病机理研究进展第23-26页
        1.4.1 葡萄种质资源简介第23-24页
        1.4.2 葡萄抗白粉病机理研究进展第24-25页
        1.4.3 中国野生葡萄抗白粉病研究进展第25-26页
    1.5 本文的研究目的及意义第26-27页
第二章 三个中国野生葡萄转录组与欧洲葡萄基因组的结构差异分析第27-43页
    2.1 引言第27页
    2.2 材料第27-28页
        2.2.1 葡萄材料第27-28页
        2.2.2 主要仪器设备第28页
        2.2.3 主要试剂第28页
    2.3 方法第28-30页
        2.3.1 葡萄白粉病处理第28页
        2.3.2 葡萄RNA的提取及纯化第28页
        2.3.3 转录组文库构建及测序第28页
        2.3.4 数据的存储第28-29页
        2.3.5 RNA-Seq原始数据的处理第29页
        2.3.6 De novo拼接转录组及后续优化步骤第29页
        2.3.7 野生葡萄转录组与参考基因组的比较第29页
        2.3.8 转录组序列的功能注释第29页
        2.3.9 鉴定特异基因第29-30页
        2.3.10鉴定SNPs与小片段的插入和缺失(indels)第30页
        2.3.11鉴定cis-NATs第30页
    2.4 结果与分析第30-40页
        2.4.1 RNA-Seq原始数据的处理总结第30-31页
        2.4.2 De novo拼接转录组及逐步优化结果第31页
        2.4.3 野生葡萄转录组与参考基因组的比较第31-34页
        2.4.4 转录组序列的功能注释第34页
        2.4.5 鉴定特异基因第34-37页
        2.4.6 鉴定单核苷酸多态性(SNPs)与小片段的插入和缺失(indels)第37-38页
        2.4.7 鉴定cis-NATs第38-40页
    2.5 讨论第40-42页
    2.6 小结第42-43页
第三章 白粉病诱导的不同抗性野生葡萄的基因表达差异第43-56页
    3.1 引言第43页
    3.2 材料第43-44页
        3.2.1 葡萄材料第43页
        3.2.2 主要仪器设备第43页
        3.2.3 主要试剂第43-44页
    3.3 方法第44-45页
        3.3.1 葡萄白粉病处理第44页
        3.3.2 葡萄白粉病侵染过程观察试验第44页
        3.3.3 葡萄RNA的提取及纯化第44页
        3.3.4 转录组文库构建及测序第44页
        3.3.5 原始数据的前处理第44页
        3.3.6 与葡萄基因组的比对与差异基因的鉴定第44页
        3.3.7 不同抗性株系和不同时间段的差异基因的比较第44页
        3.3.8 差异基因的表达模式分析第44-45页
        3.3.9 不同差异基因簇中的R基因与转录调控相关基因的鉴定第45页
        3.3.10差异基因的富集性分析第45页
    3.4 结果与分析第45-54页
        3.4.1 白粉菌侵染野生葡萄的组织及细胞学观察结果第45页
        3.4.2 RNA-seq原始数据的处理及与参考基因组的比对第45-46页
        3.4.3 接种白粉菌的不同抗性野生葡萄的差异基因第46-49页
        3.4.4 差异基因表达模式聚类分析及比较第49页
        3.4.5 不同表达模式的差异基因簇中的R基因与转录调控相关基因第49-52页
        3.4.6 差异基因的富集性分析-GO富集性分析第52-53页
        3.4.7 差异基因的富集性分析-代谢通路富集性分析第53-54页
    3.5 讨论第54-55页
    3.6 小结第55-56页
第四章 中国野生毛葡萄VqLecRK1基因的抗病功能分析第56-76页
    4.1 引言第56页
    4.2 材料第56-57页
        4.2.1 试验材料第56页
        4.2.2 主要仪器设备第56页
        4.2.3 菌株与载体第56-57页
        4.2.4 引物与测序第57页
        4.2.5 主要试剂第57页
    4.3 方法第57-63页
        4.3.1 葡萄白粉病处理第57-58页
        4.3.2 葡萄RNA的提取纯化及反转录第58页
        4.3.3 葡萄Lec RK1基因克隆及序列分析第58页
        4.3.4 亚细胞定位载体构建第58-59页
        4.3.5 拟南芥原生质体亚细胞定位试验第59页
        4.3.6 植物过量稳定表达载体构建第59-60页
        4.3.7 农杆菌介导的拟南芥转化第60-61页
        4.3.8 拟南芥病原菌接种与病情调查第61-62页
        4.3.9 染色及显微镜观察第62页
        4.3.10气孔观察第62-63页
        4.3.11 PAMP处理下转基因拟南芥叶片的胼胝质积累第63页
        4.3.12实时荧光定量PCR(q RT-PCR)第63页
    4.4 结果与分析第63-74页
        4.4.1 野生葡萄LecRK1对病原菌的响应第63页
        4.4.2 毛葡萄VqLec RK1的克隆及序列分析第63-65页
        4.4.3 毛葡萄VqLec RK1的亚细胞定位分析第65页
        4.4.4 转VqLecRK1基因拟南芥的获得第65-67页
        4.4.5 转VqLec RK1基因拟南芥对白粉病的抗性第67-69页
        4.4.6 转VqLecRK1基因拟南芥对Pst DC3000的抗性第69-72页
        4.4.7 转VqLecRK1基因拟南芥的PTI的应答第72-74页
    4.5 讨论第74-75页
    4.6 小结第75-76页
第五章 中国野生毛葡萄VqBAK1基因的抗病相功能分析第76-90页
    5.1 引言第76页
    5.2 材料第76-77页
        5.2.1 试验材料第76页
        5.2.2 主要仪器设备第76页
        5.2.3 菌株第76页
        5.2.4 引物第76-77页
        5.2.5 主要试剂第77页
    5.3 方法第77-78页
        5.3.1 葡萄白粉病处理第77页
        5.3.2 葡萄RNA的提取、纯化及反转录第77页
        5.3.3 葡萄BAK1基因克隆及序列分析第77-78页
        5.3.4 亚细胞定位载体构建第78页
        5.3.5 拟南芥原生质体亚细胞定位试验第78页
        5.3.6 植物表达载体构建第78页
        5.3.7 农杆菌介导的拟南芥转化第78页
        5.3.8 其他试验方法第78页
    5.4 结果与分析第78-87页
        5.4.1 毛葡萄SERK家族对病原菌的响应第78-79页
        5.4.2 毛葡萄VqBAK1的克隆及序列分析第79-80页
        5.4.3 VqBAK1亚细胞定位第80-81页
        5.4.4 转VqBAK1基因拟南芥突变体的获得第81-83页
        5.4.5 VqBAK1也具有控制细胞程序性死亡的功能第83页
        5.4.6 转VqBAK1植株对Pst DC3000的抗性第83-85页
        5.4.7 VqBAK1转基因拟南芥的PTI的应答第85-86页
        5.4.8 VqBAK1对气孔的影响第86-87页
    5.5 讨论第87-89页
    5.6 小结第89-90页
参考文献第90-107页
缩略词第107-108页
致谢第108-109页
作者简介第109-110页

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