摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-10页 |
第一章 文献综述 | 第15-27页 |
1.1 植物抗病机制研究进展 | 第15-21页 |
1.1.1 细胞外的病原体识别机制,相关分子模式 | 第15-18页 |
1.1.2 细胞内的效应蛋白识别机制 | 第18-19页 |
1.1.3 信号转导及下游响应基因 | 第19-21页 |
1.2 Lec RK研究进展 | 第21-22页 |
1.3 BAK1研究进展 | 第22-23页 |
1.4 葡萄与葡萄抗白粉病机理研究进展 | 第23-26页 |
1.4.1 葡萄种质资源简介 | 第23-24页 |
1.4.2 葡萄抗白粉病机理研究进展 | 第24-25页 |
1.4.3 中国野生葡萄抗白粉病研究进展 | 第25-26页 |
1.5 本文的研究目的及意义 | 第26-27页 |
第二章 三个中国野生葡萄转录组与欧洲葡萄基因组的结构差异分析 | 第27-43页 |
2.1 引言 | 第27页 |
2.2 材料 | 第27-28页 |
2.2.1 葡萄材料 | 第27-28页 |
2.2.2 主要仪器设备 | 第28页 |
2.2.3 主要试剂 | 第28页 |
2.3 方法 | 第28-30页 |
2.3.1 葡萄白粉病处理 | 第28页 |
2.3.2 葡萄RNA的提取及纯化 | 第28页 |
2.3.3 转录组文库构建及测序 | 第28页 |
2.3.4 数据的存储 | 第28-29页 |
2.3.5 RNA-Seq原始数据的处理 | 第29页 |
2.3.6 De novo拼接转录组及后续优化步骤 | 第29页 |
2.3.7 野生葡萄转录组与参考基因组的比较 | 第29页 |
2.3.8 转录组序列的功能注释 | 第29页 |
2.3.9 鉴定特异基因 | 第29-30页 |
2.3.10鉴定SNPs与小片段的插入和缺失(indels) | 第30页 |
2.3.11鉴定cis-NATs | 第30页 |
2.4 结果与分析 | 第30-40页 |
2.4.1 RNA-Seq原始数据的处理总结 | 第30-31页 |
2.4.2 De novo拼接转录组及逐步优化结果 | 第31页 |
2.4.3 野生葡萄转录组与参考基因组的比较 | 第31-34页 |
2.4.4 转录组序列的功能注释 | 第34页 |
2.4.5 鉴定特异基因 | 第34-37页 |
2.4.6 鉴定单核苷酸多态性(SNPs)与小片段的插入和缺失(indels) | 第37-38页 |
2.4.7 鉴定cis-NATs | 第38-40页 |
2.5 讨论 | 第40-42页 |
2.6 小结 | 第42-43页 |
第三章 白粉病诱导的不同抗性野生葡萄的基因表达差异 | 第43-56页 |
3.1 引言 | 第43页 |
3.2 材料 | 第43-44页 |
3.2.1 葡萄材料 | 第43页 |
3.2.2 主要仪器设备 | 第43页 |
3.2.3 主要试剂 | 第43-44页 |
3.3 方法 | 第44-45页 |
3.3.1 葡萄白粉病处理 | 第44页 |
3.3.2 葡萄白粉病侵染过程观察试验 | 第44页 |
3.3.3 葡萄RNA的提取及纯化 | 第44页 |
3.3.4 转录组文库构建及测序 | 第44页 |
3.3.5 原始数据的前处理 | 第44页 |
3.3.6 与葡萄基因组的比对与差异基因的鉴定 | 第44页 |
3.3.7 不同抗性株系和不同时间段的差异基因的比较 | 第44页 |
3.3.8 差异基因的表达模式分析 | 第44-45页 |
3.3.9 不同差异基因簇中的R基因与转录调控相关基因的鉴定 | 第45页 |
3.3.10差异基因的富集性分析 | 第45页 |
3.4 结果与分析 | 第45-54页 |
3.4.1 白粉菌侵染野生葡萄的组织及细胞学观察结果 | 第45页 |
3.4.2 RNA-seq原始数据的处理及与参考基因组的比对 | 第45-46页 |
3.4.3 接种白粉菌的不同抗性野生葡萄的差异基因 | 第46-49页 |
3.4.4 差异基因表达模式聚类分析及比较 | 第49页 |
3.4.5 不同表达模式的差异基因簇中的R基因与转录调控相关基因 | 第49-52页 |
3.4.6 差异基因的富集性分析-GO富集性分析 | 第52-53页 |
3.4.7 差异基因的富集性分析-代谢通路富集性分析 | 第53-54页 |
3.5 讨论 | 第54-55页 |
3.6 小结 | 第55-56页 |
第四章 中国野生毛葡萄VqLecRK1基因的抗病功能分析 | 第56-76页 |
4.1 引言 | 第56页 |
4.2 材料 | 第56-57页 |
4.2.1 试验材料 | 第56页 |
4.2.2 主要仪器设备 | 第56页 |
4.2.3 菌株与载体 | 第56-57页 |
4.2.4 引物与测序 | 第57页 |
4.2.5 主要试剂 | 第57页 |
4.3 方法 | 第57-63页 |
4.3.1 葡萄白粉病处理 | 第57-58页 |
4.3.2 葡萄RNA的提取纯化及反转录 | 第58页 |
4.3.3 葡萄Lec RK1基因克隆及序列分析 | 第58页 |
4.3.4 亚细胞定位载体构建 | 第58-59页 |
4.3.5 拟南芥原生质体亚细胞定位试验 | 第59页 |
4.3.6 植物过量稳定表达载体构建 | 第59-60页 |
4.3.7 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第60-61页 |
4.3.8 拟南芥病原菌接种与病情调查 | 第61-62页 |
4.3.9 染色及显微镜观察 | 第62页 |
4.3.10气孔观察 | 第62-63页 |
4.3.11 PAMP处理下转基因拟南芥叶片的胼胝质积累 | 第63页 |
4.3.12实时荧光定量PCR(q RT-PCR) | 第63页 |
4.4 结果与分析 | 第63-74页 |
4.4.1 野生葡萄LecRK1对病原菌的响应 | 第63页 |
4.4.2 毛葡萄VqLec RK1的克隆及序列分析 | 第63-65页 |
4.4.3 毛葡萄VqLec RK1的亚细胞定位分析 | 第65页 |
4.4.4 转VqLecRK1基因拟南芥的获得 | 第65-67页 |
4.4.5 转VqLec RK1基因拟南芥对白粉病的抗性 | 第67-69页 |
4.4.6 转VqLecRK1基因拟南芥对Pst DC3000的抗性 | 第69-72页 |
4.4.7 转VqLecRK1基因拟南芥的PTI的应答 | 第72-74页 |
4.5 讨论 | 第74-75页 |
4.6 小结 | 第75-76页 |
第五章 中国野生毛葡萄VqBAK1基因的抗病相功能分析 | 第76-90页 |
5.1 引言 | 第76页 |
5.2 材料 | 第76-77页 |
5.2.1 试验材料 | 第76页 |
5.2.2 主要仪器设备 | 第76页 |
5.2.3 菌株 | 第76页 |
5.2.4 引物 | 第76-77页 |
5.2.5 主要试剂 | 第77页 |
5.3 方法 | 第77-78页 |
5.3.1 葡萄白粉病处理 | 第77页 |
5.3.2 葡萄RNA的提取、纯化及反转录 | 第77页 |
5.3.3 葡萄BAK1基因克隆及序列分析 | 第77-78页 |
5.3.4 亚细胞定位载体构建 | 第78页 |
5.3.5 拟南芥原生质体亚细胞定位试验 | 第78页 |
5.3.6 植物表达载体构建 | 第78页 |
5.3.7 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第78页 |
5.3.8 其他试验方法 | 第78页 |
5.4 结果与分析 | 第78-87页 |
5.4.1 毛葡萄SERK家族对病原菌的响应 | 第78-79页 |
5.4.2 毛葡萄VqBAK1的克隆及序列分析 | 第79-80页 |
5.4.3 VqBAK1亚细胞定位 | 第80-81页 |
5.4.4 转VqBAK1基因拟南芥突变体的获得 | 第81-83页 |
5.4.5 VqBAK1也具有控制细胞程序性死亡的功能 | 第83页 |
5.4.6 转VqBAK1植株对Pst DC3000的抗性 | 第83-85页 |
5.4.7 VqBAK1转基因拟南芥的PTI的应答 | 第85-86页 |
5.4.8 VqBAK1对气孔的影响 | 第86-87页 |
5.5 讨论 | 第87-89页 |
5.6 小结 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-107页 |
缩略词 | 第107-108页 |
致谢 | 第108-109页 |
作者简介 | 第109-110页 |