摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-10页 |
第一章 文献综述 | 第14-31页 |
1.1 杨树叶锈病研究现状 | 第14-15页 |
1.1.1 杨树叶锈病的分布及危害 | 第14页 |
1.1.2 松-杨栅锈菌及其生理小种分化 | 第14-15页 |
1.2 杨树与叶锈菌互作研究现状 | 第15-19页 |
1.2.1 杨树叶锈病的组织与细胞病理学 | 第16页 |
1.2.2 杨树叶锈病的生物化学研究 | 第16-17页 |
1.2.3 杨树叶锈菌寄主抗病性分子标记 | 第17-18页 |
1.2.4 杨树与叶锈菌的全基因组测序 | 第18页 |
1.2.5 杨树与叶锈菌互作转录组水平研究 | 第18-19页 |
1.3 植物抗病机制 | 第19-24页 |
1.3.1 植物抗病与防卫反应 | 第19-20页 |
1.3.2 植物抗病基因 | 第20-21页 |
1.3.3 杨树抗病基因 | 第21-22页 |
1.3.4 植物防卫基因 | 第22页 |
1.3.5 杨树与叶锈菌互作的防卫基因 | 第22-24页 |
1.4 寄主防卫基因的分离、克隆及表达分析技术 | 第24-29页 |
1.4.1 抑制性差减杂交 | 第24-26页 |
1.4.2 微阵列分析 | 第26-27页 |
1.4.3 表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs) | 第27-28页 |
1.4.4 高通量测序技术 | 第28页 |
1.4.5 cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE) | 第28-29页 |
1.4.6 RT-q PCR(real-time quantitative PCR)技术 | 第29页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
第二章 叶锈菌诱导的杨树SSH文库构建 | 第31-53页 |
2.1 材料与方法 | 第31-41页 |
2.1.1 试验材料 | 第31-32页 |
2.1.2 锈菌接种及采样 | 第32页 |
2.1.3 总RNA提取及mRNA分离纯化 | 第32-34页 |
2.1.4 抑制差减杂交 | 第34-39页 |
2.1.5 PCR产物的克隆 | 第39-40页 |
2.1.6 cDNA片段测序及序列分析 | 第40-41页 |
2.2 结果与分析 | 第41-49页 |
2.2.1 川杨接种Sb052的反应型 | 第41页 |
2.2.2 杨树叶片总RNA及mRNA质量检测 | 第41-42页 |
2.2.3 酶切效率检测 | 第42-43页 |
2.2.4 接头效率检测 | 第43页 |
2.2.5 差减效率检测 | 第43-44页 |
2.2.6 阳性克隆的筛选 | 第44-45页 |
2.2.7 ESTs序列分析 | 第45-49页 |
2.3 结论与讨论 | 第49-53页 |
第三章 杨树与松-杨栅锈菌互作中寄主病程相关及苯丙氨酸解氨酶基因的克隆 | 第53-73页 |
3.1 材料与方法 | 第53-59页 |
3.1.1 试验材料 | 第53-54页 |
3.1.2 锈菌接种及采样 | 第54页 |
3.1.3 RNA的提取及检测 | 第54页 |
3.1.4 cDNA第一链的合成 | 第54-55页 |
3.1.5 RACE末端扩增引物设计及合成 | 第55-56页 |
3.1.6 cDNA末端的快速扩增 | 第56-58页 |
3.1.7 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第58-59页 |
3.1.8 PCR产物的连接与转化与测序 | 第59页 |
3.1.9 RACE全长序列的拼接 | 第59页 |
3.1.10 cDNA全长序列的生物信息学分析 | 第59页 |
3.2 结果与分析 | 第59-70页 |
3.2.1 PsDR基因克隆 | 第59-60页 |
3.2.2 PsDR基因编码蛋白初级结构分析及亲水/疏水性分析 | 第60-61页 |
3.2.3 PsDR基因编码蛋白的信号肽、跨膜区预测及亚细胞定位分析 | 第61-64页 |
3.2.4 PsDR基因编码蛋白蛋白激酶磷酸化位点、二级结构预测 | 第64页 |
3.2.5 PsDR基因编码蛋白功能位点及结构特征分析 | 第64-65页 |
3.2.6 PsDR基因编码蛋白的序列比对及系统进化树 | 第65-70页 |
3.3 结论与讨论 | 第70-73页 |
第四章 杨树与松-杨栅锈菌互作寄主防卫相关基因表达动态分析 | 第73-83页 |
4.1 材料与方法 | 第73-75页 |
4.1.1 供试材料及处理 | 第73-74页 |
4.1.2 总RNA提取 | 第74页 |
4.1.3 去除基因组DNA | 第74页 |
4.1.4 cDNA合成 | 第74页 |
4.1.5 实时定量PCR | 第74-75页 |
4.2 结果与分析 | 第75-80页 |
4.2.1 川杨接种Th053的反应型 | 第75-76页 |
4.2.2 非亲和互作川杨不同组织PsDR基因的表达模式 | 第76-78页 |
4.2.3 不同互作中PsDR基因及NPR1和ABC转运子基因的时间动态表达 | 第78-80页 |
4.3 结论与讨论 | 第80-83页 |
4.3.1 川杨PsPR基因与防卫反应的关系 | 第80-81页 |
4.3.2 PAL基因与防卫反应的关系 | 第81页 |
4.3.3 NPR1与ABC转运子基因与防卫反应的关系 | 第81-83页 |
第五章 杨树与松-杨栅锈菌互作寄主过氧化物还原酶基因克隆及表达分析 | 第83-96页 |
5.1 材料与方法 | 第84-86页 |
5.1.1 试验材料及处理 | 第84页 |
5.1.2 总RNA提取 | 第84页 |
5.1.3 cDNA第一链合成 | 第84页 |
5.1.4 RACE末端扩增 | 第84-85页 |
5.1.5 PCR扩增产物纯化回收与克隆 | 第85页 |
5.1.6 cDNA全长序列分析 | 第85页 |
5.1.7 cDNA双链合成 | 第85页 |
5.1.8 实时定量PCR | 第85-86页 |
5.2 结果与分析 | 第86-94页 |
5.2.1 PsPrx基因全长序列的克隆 | 第86-87页 |
5.2.2 PsPrx基因一级结构预测分析 | 第87页 |
5.2.3 PsPrx基因编码的氨基酸磷酸化位点及二级结构预测分析 | 第87-88页 |
5.2.4 PsPrx基因编码预测蛋白序列保守结构特征分析 | 第88-89页 |
5.2.5 PsPrx基因编码预测蛋白序列比对及系统发育树构建 | 第89-92页 |
5.2.6 川杨与MLP非亲和组合中PsPrx基因在川杨不同组织中的表达动态 | 第92-93页 |
5.2.7 受MLP侵染的川杨PsPrx基因表达的时间动态 | 第93-94页 |
5.3 结论与讨论 | 第94-96页 |
全文结论 | 第96-99页 |
参考文献 | 第99-110页 |
附录 | 第110-115页 |
致谢 | 第115-116页 |
作者简介 | 第116页 |