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杨树与松-杨栅锈菌互作寄主表达序列标签(ESTs)及其防卫相关基因分析

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-10页
第一章 文献综述第14-31页
    1.1 杨树叶锈病研究现状第14-15页
        1.1.1 杨树叶锈病的分布及危害第14页
        1.1.2 松-杨栅锈菌及其生理小种分化第14-15页
    1.2 杨树与叶锈菌互作研究现状第15-19页
        1.2.1 杨树叶锈病的组织与细胞病理学第16页
        1.2.2 杨树叶锈病的生物化学研究第16-17页
        1.2.3 杨树叶锈菌寄主抗病性分子标记第17-18页
        1.2.4 杨树与叶锈菌的全基因组测序第18页
        1.2.5 杨树与叶锈菌互作转录组水平研究第18-19页
    1.3 植物抗病机制第19-24页
        1.3.1 植物抗病与防卫反应第19-20页
        1.3.2 植物抗病基因第20-21页
        1.3.3 杨树抗病基因第21-22页
        1.3.4 植物防卫基因第22页
        1.3.5 杨树与叶锈菌互作的防卫基因第22-24页
    1.4 寄主防卫基因的分离、克隆及表达分析技术第24-29页
        1.4.1 抑制性差减杂交第24-26页
        1.4.2 微阵列分析第26-27页
        1.4.3 表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)第27-28页
        1.4.4 高通量测序技术第28页
        1.4.5 cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)第28-29页
        1.4.6 RT-q PCR(real-time quantitative PCR)技术第29页
    1.5 本研究的目的和意义第29-31页
第二章 叶锈菌诱导的杨树SSH文库构建第31-53页
    2.1 材料与方法第31-41页
        2.1.1 试验材料第31-32页
        2.1.2 锈菌接种及采样第32页
        2.1.3 总RNA提取及mRNA分离纯化第32-34页
        2.1.4 抑制差减杂交第34-39页
        2.1.5 PCR产物的克隆第39-40页
        2.1.6 cDNA片段测序及序列分析第40-41页
    2.2 结果与分析第41-49页
        2.2.1 川杨接种Sb052的反应型第41页
        2.2.2 杨树叶片总RNA及mRNA质量检测第41-42页
        2.2.3 酶切效率检测第42-43页
        2.2.4 接头效率检测第43页
        2.2.5 差减效率检测第43-44页
        2.2.6 阳性克隆的筛选第44-45页
        2.2.7 ESTs序列分析第45-49页
    2.3 结论与讨论第49-53页
第三章 杨树与松-杨栅锈菌互作中寄主病程相关及苯丙氨酸解氨酶基因的克隆第53-73页
    3.1 材料与方法第53-59页
        3.1.1 试验材料第53-54页
        3.1.2 锈菌接种及采样第54页
        3.1.3 RNA的提取及检测第54页
        3.1.4 cDNA第一链的合成第54-55页
        3.1.5 RACE末端扩增引物设计及合成第55-56页
        3.1.6 cDNA末端的快速扩增第56-58页
        3.1.7 PCR扩增产物的回收与纯化第58-59页
        3.1.8 PCR产物的连接与转化与测序第59页
        3.1.9 RACE全长序列的拼接第59页
        3.1.10 cDNA全长序列的生物信息学分析第59页
    3.2 结果与分析第59-70页
        3.2.1 PsDR基因克隆第59-60页
        3.2.2 PsDR基因编码蛋白初级结构分析及亲水/疏水性分析第60-61页
        3.2.3 PsDR基因编码蛋白的信号肽、跨膜区预测及亚细胞定位分析第61-64页
        3.2.4 PsDR基因编码蛋白蛋白激酶磷酸化位点、二级结构预测第64页
        3.2.5 PsDR基因编码蛋白功能位点及结构特征分析第64-65页
        3.2.6 PsDR基因编码蛋白的序列比对及系统进化树第65-70页
    3.3 结论与讨论第70-73页
第四章 杨树与松-杨栅锈菌互作寄主防卫相关基因表达动态分析第73-83页
    4.1 材料与方法第73-75页
        4.1.1 供试材料及处理第73-74页
        4.1.2 总RNA提取第74页
        4.1.3 去除基因组DNA第74页
        4.1.4 cDNA合成第74页
        4.1.5 实时定量PCR第74-75页
    4.2 结果与分析第75-80页
        4.2.1 川杨接种Th053的反应型第75-76页
        4.2.2 非亲和互作川杨不同组织PsDR基因的表达模式第76-78页
        4.2.3 不同互作中PsDR基因及NPR1和ABC转运子基因的时间动态表达第78-80页
    4.3 结论与讨论第80-83页
        4.3.1 川杨PsPR基因与防卫反应的关系第80-81页
        4.3.2 PAL基因与防卫反应的关系第81页
        4.3.3 NPR1与ABC转运子基因与防卫反应的关系第81-83页
第五章 杨树与松-杨栅锈菌互作寄主过氧化物还原酶基因克隆及表达分析第83-96页
    5.1 材料与方法第84-86页
        5.1.1 试验材料及处理第84页
        5.1.2 总RNA提取第84页
        5.1.3 cDNA第一链合成第84页
        5.1.4 RACE末端扩增第84-85页
        5.1.5 PCR扩增产物纯化回收与克隆第85页
        5.1.6 cDNA全长序列分析第85页
        5.1.7 cDNA双链合成第85页
        5.1.8 实时定量PCR第85-86页
    5.2 结果与分析第86-94页
        5.2.1 PsPrx基因全长序列的克隆第86-87页
        5.2.2 PsPrx基因一级结构预测分析第87页
        5.2.3 PsPrx基因编码的氨基酸磷酸化位点及二级结构预测分析第87-88页
        5.2.4 PsPrx基因编码预测蛋白序列保守结构特征分析第88-89页
        5.2.5 PsPrx基因编码预测蛋白序列比对及系统发育树构建第89-92页
        5.2.6 川杨与MLP非亲和组合中PsPrx基因在川杨不同组织中的表达动态第92-93页
        5.2.7 受MLP侵染的川杨PsPrx基因表达的时间动态第93-94页
    5.3 结论与讨论第94-96页
全文结论第96-99页
参考文献第99-110页
附录第110-115页
致谢第115-116页
作者简介第116页

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