| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 干旱胁迫对植物的影响 | 第14-17页 |
| 1.1.1 干旱胁迫对植物形态的影响 | 第14-15页 |
| 1.1.2 干旱胁迫对植物生长与发育的影响 | 第15页 |
| 1.1.3 干旱胁迫对植物膜系统的影响 | 第15页 |
| 1.1.4 干旱胁迫对植物光合作用的影响 | 第15-16页 |
| 1.1.5 干旱胁迫对植物活性氧的影响 | 第16-17页 |
| 1.2 植物适应干旱胁迫的生理生化机制 | 第17-19页 |
| 1.2.1 渗透调节物质 | 第17-18页 |
| 1.2.2 抗氧化防御系统 | 第18页 |
| 1.2.3 激素调节 | 第18-19页 |
| 1.3 干旱胁迫响应基因 | 第19-22页 |
| 1.3.1 信号传导蛋白基因 | 第19页 |
| 1.3.2 调节蛋白基因 | 第19-20页 |
| 1.3.3 功能蛋白基因 | 第20-22页 |
| 1.3.3.1 渗透调节物质合成相关基因 | 第20-21页 |
| 1.3.3.2 胚胎发育晚期丰富蛋白基因 | 第21页 |
| 1.3.3.3 水通道蛋白基因 | 第21-22页 |
| 1.4 本实验的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 材料培养及其处理 | 第23页 |
| 2.1.3 载体与菌株 | 第23页 |
| 2.1.4 酶与生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 实验引物 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.2.5 表达载体的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.5.1 基因克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.5.2 连接 | 第27页 |
| 2.2.5.3 重组载体转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 2.2.5.4 菌落筛选 | 第28页 |
| 2.2.5.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.2.5.6 农杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5.7 冻融法转化农杆菌 | 第29页 |
| 2.2.6 R1-A-like蛋白的亚细胞定位 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 亚细胞定位载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 瞬时表达本生烟 | 第30页 |
| 2.2.7 转化植株 | 第30-32页 |
| 2.2.7.1 花浸法转化拟南芥 | 第30-31页 |
| 2.2.7.2 农杆菌介导转化烟草 | 第31-32页 |
| 2.2.8 转基因植株的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.8.1 植株基因组总DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.8.2 转基因植株PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.8.3 qRT-PCR转录水平鉴定转基因植株 | 第33页 |
| 2.2.9 转基因植株生理指标测定 | 第33-36页 |
| 2.2.9.1 失水速率的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.2 相对含水量的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.3 脯氨酸含量的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.4 可溶性糖的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.9.5 丙二醛含量的测定 | 第34页 |
| 2.2.9.6 过氧化氢含量的测定 | 第34页 |
| 2.2.9.7 超氧阴离子的测定 | 第34页 |
| 2.2.9.8 DAB和NBT染色 | 第34页 |
| 2.2.9.9 抗氧化酶活性的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.9.10 光合速率的测定 | 第35页 |
| 2.2.9.11 叶绿素荧光参数的测定 | 第35页 |
| 2.2.9.12 叶绿素含量的测定 | 第35页 |
| 2.2.9.13 抗氧化酶基因和干旱胁迫相关基因表达 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-55页 |
| 3.1 NtR1-A-like基因克隆及过表达载体的构建 | 第36页 |
| 3.2 R1-A-like蛋白的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.2.1 R1-A-like蛋白的理化性质分析 | 第36-37页 |
| 3.2.2 R1-A-like蛋白的翻译后修饰分析 | 第37-38页 |
| 3.2.3 R1-A-like蛋白的结构分析 | 第38-39页 |
| 3.3 NtR1-A-like表达模式分析 | 第39-40页 |
| 3.3.1 NtR1-A-like启动子调控元件分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 NtR1-A-like的组织表达模式分析 | 第40页 |
| 3.3.3 激素和非生物胁迫诱导下NtR1-A-like的表达模式分析 | 第40页 |
| 3.4 R1-A-like蛋白的亚细胞定位 | 第40-42页 |
| 3.5 NtR1-A-like转基因植株筛选与鉴定 | 第42页 |
| 3.6 过表达NtR1-A-like降低转基因拟南芥的干旱抗性 | 第42-48页 |
| 3.6.1 过表达NtR1-A-like影响拟南芥植株生长及水分含量 | 第42-43页 |
| 3.6.2 过表达NtR1-A-like降低拟南芥种子的干旱抗性 | 第43-44页 |
| 3.6.3 过表达NtR1-A-like降低拟南芥渗透调节物质的含量 | 第44-45页 |
| 3.6.4 过表达NtR1-A-like增加拟南芥活性氧的积累 | 第45-46页 |
| 3.6.5 过表达NtR1-A-like加重拟南芥细胞膜的损伤 | 第46页 |
| 3.6.6 过表达NtR1-A-like降低拟南芥抗氧化酶的活性 | 第46页 |
| 3.6.7 过表达NtR1-A-like降低拟南芥抗氧化酶基因的表达 | 第46-48页 |
| 3.6.8 过表达NtR1-A-like降低拟南芥干旱胁迫相关基因的表达 | 第48页 |
| 3.7 过表达NtR1-A-like降低转基因烟草的干旱抗性 | 第48-55页 |
| 3.7.1 过表达NtR1-A-like影响烟草植株的生长 | 第48-49页 |
| 3.7.2 过表达NtR1-A-like降低烟草渗透调节物质的含量 | 第49-50页 |
| 3.7.3 过表达NtR1-A-like增加烟草活性氧的积累 | 第50-51页 |
| 3.7.4 过表达NtR1-A-like加重烟草细胞膜的损伤 | 第51页 |
| 3.7.5 过表达NtR1-A-like降低烟草抗氧化酶的活性 | 第51-52页 |
| 3.7.6 过表达NtR1-A-like降低烟草的光合作用和叶绿素含量 | 第52-53页 |
| 3.7.7 过表达NtR1-A-like降低烟草抗氧化酶基因的表达 | 第53页 |
| 3.7.8 过表达NtR1-A-like降低烟草干旱胁迫相关基因的表达 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 R1-A-like蛋白的生物信息学分析 | 第55页 |
| 4.2 NtR1-A-like基因的表达模式 | 第55页 |
| 4.3 过表达NtR1-A-like降低转基因植株的干旱抗性 | 第55-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第71页 |
