| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-23页 |
| 1.1 植物萜类化合物的合成和功能 | 第15-17页 |
| 1.1.1 植物萜类物质的合成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 萜类代谢途径间的交流 | 第16-17页 |
| 1.1.3 萜类化合物的功能 | 第17页 |
| 1.2 萜类合酶的结构特点及研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 萜类合酶的结构和特性 | 第17-18页 |
| 1.2.2 萜类合酶的分类和研究现况 | 第18页 |
| 1.3 植物3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 HMGR的结构特点 | 第18-19页 |
| 1.3.2 HMGR的克隆研究及在植物中的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 不同物种HMGR基因家族研究概况 | 第20-21页 |
| 1.4 生物信息学研究 | 第21-22页 |
| 1.4.1 生物信息学研究的产生 | 第21页 |
| 1.4.2 生物信息学研究的内容 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-34页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23-24页 |
| 2.1.5 生物信息学数据库及软件 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 TPS基因家族成员鉴定 | 第24页 |
| 2.2.2 HMGR基因家族成员鉴定 | 第24页 |
| 2.2.3 蛋白理化性质和亚细胞定位分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 基因家族系统进化树的构建 | 第25页 |
| 2.2.5 蛋白保守域和三级结构预测 | 第25页 |
| 2.2.6 基因结构和染色体定位分析 | 第25页 |
| 2.2.7 GO功能注释分析 | 第25页 |
| 2.2.8 总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.9 cDNA第一条链的合成 | 第26页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.2.11 基因克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.12 真核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.12.1 35S表达载体构建 | 第27页 |
| 2.2.12.2 连接 | 第27-28页 |
| 2.2.12.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.13 转化农杆菌 | 第28-29页 |
| 2.2.13.1 根癌农杆菌GV3101的制备 | 第28页 |
| 2.2.13.2 冻融法转化农杆菌 | 第28-29页 |
| 2.2.14 拟南芥的转化 | 第29页 |
| 2.2.15 转基因植株鉴定 | 第29页 |
| 2.2.16 CTAB法提取基因组DNA | 第29-30页 |
| 2.2.17 转基因植株PCR鉴定及转录水平鉴定筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.17.1 转基因植株PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.2.17.2 转基因植株的转录水平鉴定及筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.18 转基因植株萜类代谢相关指标测定 | 第31-32页 |
| 2.2.18.1 转基因植株色素含量测定 | 第31页 |
| 2.2.18.2 转基因植株萜类代谢途径关键酶基因表达分析 | 第31页 |
| 2.2.18.3 拟南芥花中挥发物的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.19 氧化胁迫处理相关指标测定 | 第32-34页 |
| 2.2.19.1 丙二醛(MDA)含量测定 | 第32页 |
| 2.2.19.2 抗氧化酶活力测定 | 第32-33页 |
| 2.2.19.3 H2O2处理分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-55页 |
| 3.1 TPS基因家族生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 3.1.1 TPS基因鉴定及理化性质分析 | 第34-37页 |
| 3.1.2 TPS基因家族系统进化树的构建 | 第37页 |
| 3.2 HMGR基因家族生物信息学分析 | 第37-42页 |
| 3.2.1 梨HMGR基因家族成员的鉴定分析 | 第37-38页 |
| 3.2.2 梨HMGR基因结构及蛋白保守结构域分析 | 第38-39页 |
| 3.2.3 不同物种HMGR基因进化树构建 | 第39-40页 |
| 3.2.4 PcHMGR蛋白三级结构分析 | 第40-41页 |
| 3.2.5 PcHMGR基因家族GO注释 | 第41-42页 |
| 3.3 PcHMGR基因的表达模式分析 | 第42-45页 |
| 3.3.1 PcHMGR基因家族组织表达模式分析 | 第42页 |
| 3.3.2 非生物逆境胁迫下PcHMGR表达模式分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 不同激素诱导下PcHMGR表达模式分析 | 第43-45页 |
| 3.4 PcHMGR在拟南芥中的异源表达 | 第45-47页 |
| 3.4.1 PcHMGR1表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 转基因植株的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5 转基因拟南芥中萜类代谢途径关键酶基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.6 过表达PcHMGR1对拟南芥中萜类代谢产物的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.1 过表达PcHMGR1对拟南芥光合色素含量的影响 | 第48页 |
| 3.6.2 过表达PcHMGR1对拟南芥花中萜烯类挥发物的影响 | 第48-49页 |
| 3.7 转基因植株对外源激素敏感性的研究 | 第49-50页 |
| 3.8 转基因拟南芥的抗氧化能力分析 | 第50-55页 |
| 3.8.1 氧化胁迫下转基因拟南芥叶圆片失绿分析 | 第51页 |
| 3.8.2 氧化胁迫对转基因植株根长生长的影响 | 第51-52页 |
| 3.8.3 氧化胁迫下转基因植株抗氧化物酶活性和丙二醛含量测定 | 第52-53页 |
| 3.8.4 H_2O_2处理对转基因植株叶片抗氧化能力的分析 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第70页 |
