| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 引言 | 第11-37页 |
| 1.1 选题背景及意义 | 第11-13页 |
| 1.2 寨卡病毒的研究简史、特点 | 第13-26页 |
| 1.2.1 寨卡病毒的研究简史 | 第13-14页 |
| 1.2.2 黄病毒科及寨卡病毒的进化 | 第14-16页 |
| 1.2.3 寨卡病毒的传播途径 | 第16-17页 |
| 1.2.4 寨卡病毒的生活周期 | 第17-18页 |
| 1.2.5 寨卡病毒的症状、诊断、治疗及防治 | 第18-20页 |
| 1.2.6 寨卡病毒的生物学特征 | 第20-26页 |
| 1.3 寨卡病毒NS1的研究意义 | 第26-33页 |
| 1.3.1 NS1在病毒复制中的重要作用 | 第27-28页 |
| 1.3.2 NS1与宿主蛋白以及补体的相互作用 | 第28-29页 |
| 1.3.3 NS1作为疾病治疗和检测中的作用 | 第29-30页 |
| 1.3.4 NS1行使功能的重要结构特征 | 第30-33页 |
| 1.4 寨卡病毒MTase的研究意义 | 第33-35页 |
| 1.4.1 加帽反应 | 第33-35页 |
| 1.4.2 甲基转移酶功能的重要性 | 第35页 |
| 1.5 本课题的研究内容与意义 | 第35页 |
| 1.6 论文结构安排 | 第35-37页 |
| 第2章 ZIKV NS1_(172-352) 的晶体制备 | 第37-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-40页 |
| 2.1.1 实验仪器及耗材 | 第37页 |
| 2.1.2 实验菌种与载体 | 第37-38页 |
| 2.1.3 实验酶及试剂 | 第38页 |
| 2.1.4 培养基与缓冲液配制 | 第38-40页 |
| 2.2 实验原理 | 第40-45页 |
| 2.2.1 包涵体变复性原理 | 第40-41页 |
| 2.2.2 离子交换层析原理 | 第41-42页 |
| 2.2.3 凝胶过滤层析原理 | 第42-43页 |
| 2.2.4 蛋白的结晶学原理 | 第43-45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-50页 |
| 2.3.0 ZIKV NS1_(172-352) 基本信息 | 第45-46页 |
| 2.3.1 ZIKV NS1_(172-352) 表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.3.2 ZIKV NS1_(172-352) 的试表达 | 第48页 |
| 2.3.3 ZIKV NS1_(172-352) 的表达 | 第48-49页 |
| 2.3.4 ZIKV NS1_(172-352) 包涵体蛋白的洗涤及变复性 | 第49页 |
| 2.3.5 ZIKV NS1_(172-352) 可溶性蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.6 ZIKV NS1_(172-352) 蛋白的结晶 | 第50页 |
| 2.4 实验结果 | 第50-57页 |
| 2.4.1 ZIKV NS1_(172-352) 表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.4.2 ZIKV NS1_(172-352) 蛋白的试表达 | 第51-52页 |
| 2.4.3 ZIKV NS1_(172-352) 蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| 2.4.4 ZIKV NS1_(172-352) 蛋白的结晶 | 第54-57页 |
| 第3章 ZIKV NS1_(172-352) 的结构功能研究 | 第57-77页 |
| 3.1 结构解析原理简介 | 第57-64页 |
| 3.1.1 晶体X衍射基本原理 | 第57-59页 |
| 3.1.2 求解相位问题的方法 | 第59-61页 |
| 3.1.3 分子置换法 | 第61-64页 |
| 3.2 ZIKV NS1_(172-352) 的晶体衍射数据收集和处理 | 第64-66页 |
| 3.2.1 ZIKV NS1_(172-352) 的晶体衍射数据收集 | 第64-65页 |
| 3.2.2 ZIKV NS1_(172-352) 的晶体衍射数据处理 | 第65-66页 |
| 3.3 分子置换法解析ZIKV NS1_(172-352)的晶体结构 | 第66-68页 |
| 3.3.1 ZIKV NS1_(172-352) 的结构解析，搭建与修正 | 第66-67页 |
| 3.3.2 最终结构模型的质量评估 | 第67-68页 |
| 3.4 ZIKV NS1_(172-352) 的结构及与同种属病毒NS1结构的比较 | 第68-70页 |
| 3.5 ZIKV NS1_(172-352) 二聚体的差异性与自身进化及病毒毒力的关系 | 第70-71页 |
| 3.6 ZIKV NS1_(172-352) 电荷性质的差异性与宿主蛋白、保护性抗体结合的关系 | 第71-72页 |
| 3.7 基于结构筛选与优化ZIKV NS1的中和性抗体 | 第72-73页 |
| 3.8 ZIKV NS1整体结构以及 β-ladder在其中的功能 | 第73-75页 |
| 3.9 本章小结 | 第75-77页 |
| 第4章 基于结构研究突变对ZIKV NS1聚合的影响 | 第77-105页 |
| 4.1 实验原理 | 第77-80页 |
| 4.1.1 分析型超速离心 | 第77-78页 |
| 4.1.2 昆虫系统表达蛋白原理 | 第78-80页 |
| 4.2 实验方法 | 第80-88页 |
| 4.2.1 ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体的载体构建、表达及纯化 | 第80-81页 |
| 4.2.2 ZIKV NS1_(172-352) 以及ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体分子筛实验 | 第81页 |
| 4.2.3 ZIKV NS1_(172-352) 和ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体沉降速率实验 | 第81-82页 |
| 4.2.4 ZIKV NS1的pFastBac载体构建 | 第82-83页 |
| 4.2.5 ZIKV NS1的重组bacmid的获取 | 第83-84页 |
| 4.2.6 ZIKV NS1重组bacmid转染sf9昆虫细胞及病毒扩增 | 第84-85页 |
| 4.2.7 ZIKV NS1四种构建蛋白的试表达 | 第85-86页 |
| 4.2.8 ZIKV Op64-NS1蛋白的大量表达、纯化 | 第86-87页 |
| 4.2.9 ZIKV NS1以及ZIKV NS1 T233A突变体的分子筛实验 | 第87-88页 |
| 4.3 实验结果 | 第88-102页 |
| 4.3.0 ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体的载体构建、表达及纯化 | 第88-91页 |
| 4.3.1 ZIKV NS1_(172-352) 浓度依赖性实验 | 第91-93页 |
| 4.3.2 ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体分子筛实验以及与母体蛋白的比较 | 第93-95页 |
| 4.3.3 ZIKV NS1_(172-352) 以及ZIKV NS1_(172-352) T233A突变体沉降速率实验 | 第95-97页 |
| 4.3.4 ZIKV NS1 p Fast Bac载体构建以及重组bacmid的获取 | 第97-98页 |
| 4.3.5 ZIKV NS1试表达 | 第98-100页 |
| 4.3.6 ZIKV NS1蛋白的大量表达、纯化 | 第100页 |
| 4.3.7 ZIKV NS1 T233A重组bacmid获得以及蛋白的大量表达、纯化 | 第100-102页 |
| 4.3.8 ZIKV NS1以及ZIKV NS1 T233A突变体蛋白的聚集状态比较 | 第102页 |
| 4.4 本章小结 | 第102-105页 |
| 第5章 ZIKV甲基转移酶与抑制剂的结构 | 第105-117页 |
| 5.1 背景介绍 | 第105-106页 |
| 5.2 实验方法 | 第106-109页 |
| 5.2.1 ZIKV MTase基本信息 | 第106-107页 |
| 5.2.2 ZIKV MTase表达载体的构建 | 第107-108页 |
| 5.2.3 ZIKV MTase的表达与纯化 | 第108页 |
| 5.2.4 ZIKV MTase与抑制剂复合物的结晶 | 第108-109页 |
| 5.2.5 ZIKV MTase与抑制剂复合物晶体数据收集和处理 | 第109页 |
| 5.3 实验结果 | 第109-117页 |
| 5.3.1 ZIKV MTase的载体构建、表达、纯化 | 第109-111页 |
| 5.3.2 ZIKV MTase与抑制剂复合物的结晶与数据收集 | 第111-113页 |
| 5.3.3 ZIKV MTase与抑制剂复合物的结构及相互作用 | 第113-117页 |
| 第6章 结论与展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-135页 |
| 发表论文 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
