| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-38页 |
| 1.1 PRRSV概述 | 第12-21页 |
| 1.1.1 PRRSV病毒及分子生物学研究 | 第12-16页 |
| 1.1.2 PRRSV的致病机理 | 第16-18页 |
| 1.1.3 PRRSV感染的免疫反应 | 第18-20页 |
| 1.1.4 PRRSV防治困难及疫苗研究 | 第20-21页 |
| 1.2 抗体依赖性增强作用 | 第21-26页 |
| 1.2.1 病毒的ADE作用 | 第21-22页 |
| 1.2.2 ADE的作用机制 | 第22-23页 |
| 1.2.3 ADE的细胞内信号传导机制 | 第23-25页 |
| 1.2.4 PRRSV的ADE作用 | 第25-26页 |
| 1.3 FcγRs | 第26-33页 |
| 1.3.1 FcγRs生物学分类及特点 | 第26-29页 |
| 1.3.2 FcγR在抗病毒免疫应答中的作用 | 第29-31页 |
| 1.3.3 FcγR信号通路研究进展 | 第31-32页 |
| 1.3.4 FcγR介导的ADE作用研究进展 | 第32-33页 |
| 1.4 基因转录后的可变剪接 | 第33-37页 |
| 1.4.1 基因可变剪接的机理及调节 | 第33-35页 |
| 1.4.2 基因可变剪接在免疫调节中的作用 | 第35-36页 |
| 1.4.3 FcR的可变剪接 | 第36-37页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第37-38页 |
| 第2章 猪FcγRI剪接体克隆 | 第38-64页 |
| 2.1 引言 | 第38页 |
| 2.2 实验材料 | 第38-43页 |
| 2.2.1 实验动物、细胞、载体、菌株 | 第38-39页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第39-42页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-50页 |
| 2.3.1 传代细胞的复苏与培养 | 第43页 |
| 2.3.2 猪原代PAM细胞的分离与培养 | 第43页 |
| 2.3.3 总RNA提取及cDNA合成 | 第43-44页 |
| 2.3.4 基因克隆 | 第44-47页 |
| 2.3.5 猪FcγRI胞外蛋白表达 | 第47-48页 |
| 2.3.6 兔源猪FcγRI多抗制备 | 第48-50页 |
| 2.4 实验结果 | 第50-61页 |
| 2.4.1 猪FcγRI基因的克隆与鉴定 | 第50-53页 |
| 2.4.2 猪FcγRI基因的选择性剪接 | 第53-57页 |
| 2.4.3 PAM细胞中FcγRI选择性剪接表达谱 | 第57-58页 |
| 2.4.4 pFcγRI-GST蛋白表达及抗体制备 | 第58-61页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第61-63页 |
| 2.5.1 猪FcγRI基因选择性剪接机制 | 第61-62页 |
| 2.5.2 膜型及可溶型猪FcγRI选择性剪接体 | 第62-63页 |
| 2.5.3 兔源pFcγRI抗体的特异性评价 | 第63页 |
| 2.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 第3章 猪FcγRI的可变剪接对PRRSVADE的影响 | 第64-90页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 实验材料 | 第64-66页 |
| 3.2.1 细胞、载体、菌株、病毒及血清 | 第64-65页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第66页 |
| 3.3 实验方法 | 第66-73页 |
| 3.3.1 传代细胞的复苏与培养 | 第66页 |
| 3.3.2 pcDNA3.1-FcγRI载体构建及无内毒素质粒提取 | 第66-69页 |
| 3.3.3 细胞转染 | 第69页 |
| 3.3.4 PRRSV毒力及阳性IgG效价测定 | 第69-70页 |
| 3.3.5 相对荧光定量PCR | 第70-71页 |
| 3.3.6 PRRSVADE感染条件的确定 | 第71-72页 |
| 3.3.7 膜型、可溶型FcγRI对PRRSVADE的影响 | 第72-73页 |
| 3.3.8 免疫荧光共聚焦检测细胞骨架及内吞作用 | 第73页 |
| 3.4 实验结果 | 第73-85页 |
| 3.4.1 PRRSV毒力及ADE感染条件 | 第73-75页 |
| 3.4.2 pcDNA3.1-pFcγRI重组质粒的构建及表达 | 第75-77页 |
| 3.4.3 FcγRI剪接体介导PRRSVADE效应 | 第77-80页 |
| 3.4.4 FcγRI可变剪接介导病毒内化的差异 | 第80-83页 |
| 3.4.5 FcγRI可变剪接对PRRSViADE的影响 | 第83-85页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第85-88页 |
| 3.5.1 猪FcγRI介导PRRSV的ADE作用 | 第85-86页 |
| 3.5.2 膜型FcγRI促进PRRSVADE的病毒内化 | 第86-87页 |
| 3.5.3 可溶型FcγRI逆向调节PRRSV的ADE作用 | 第87-88页 |
| 3.6 本章小结 | 第88-90页 |
| 第4章 猪FcγRI介导的PRRSVADE免疫应答特点 | 第90-120页 |
| 4.1 引言 | 第90页 |
| 4.2 实验材料 | 第90-91页 |
| 4.2.1 细胞、病毒及血清 | 第90-91页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第91页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第91页 |
| 4.3 实验方法 | 第91-97页 |
| 4.3.1 转录组测序(RAN-seq)样品制备及测序 | 第91-92页 |
| 4.3.2 转录组测序数据处理及分析 | 第92-94页 |
| 4.3.3 相对荧光定量PCR | 第94-95页 |
| 4.3.4 猪FcγRI剪接体检测 | 第95页 |
| 4.3.5 共聚焦检测FcγRI在PAM细胞的分布 | 第95-96页 |
| 4.3.6 TCRVβ文库构建及检测 | 第96-97页 |
| 4.4 实验结果 | 第97-114页 |
| 4.4.1 转录组测序质量评估 | 第97-98页 |
| 4.4.2 不同处理细胞中基因差异表达分析 | 第98-101页 |
| 4.4.3 PRRSV及ADE感染对细胞内化及免疫调节的作用 | 第101-106页 |
| 4.4.4 PRRSV影响FcγR转录及FcγRI剪接体表型 | 第106-111页 |
| 4.4.5 PRRSVADE对T细胞亚群的影响 | 第111-114页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第114-118页 |
| 4.5.1 ADE效应下细胞的抗病毒免疫特性 | 第114-115页 |
| 4.5.2 ADE效应下靶细胞应答机制 | 第115-117页 |
| 4.5.3 PRRSV感染影响FcγRI选择性剪接 | 第117页 |
| 4.5.4 PRRSV对特异性TCRVβT细胞的活化 | 第117-118页 |
| 4.6 本章小结 | 第118-120页 |
| 结论与展望 | 第120-121页 |
| 本文创新之处 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-139页 |
| 附录 | 第139-146页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
