| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 胰岛素样生长因子-1 | 第12-16页 |
| 1.1.1 简介 | 第12-14页 |
| 1.1.2 胰岛素样生长因子-1的应用 | 第14-15页 |
| 1.1.3 重组生产研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2 无血清培养基中蛋白类补充因子生产研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 无血清培养基简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 结合蛋白类补充因子重组生产 | 第17-18页 |
| 1.2.3 贴壁类与生长因子类补充因子重组生产 | 第18-20页 |
| 1.3 重组表达系统与大肠杆菌可溶表达策略 | 第20-23页 |
| 1.3.1 外源蛋白质重组表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.2 溶表达策略简介 | 第21页 |
| 1.3.3 提高大肠杆菌可溶表达常用方法 | 第21-23页 |
| 1.4 大肠杆菌高密度发酵 | 第23-26页 |
| 1.4.1 简介 | 第23页 |
| 1.4.2 主要影响因素 | 第23-26页 |
| 1.5 研究内容与目的 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.1 工具酶与主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 2.3 分子生物学相关操作 | 第29-30页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第29页 |
| 2.3.2 凝胶回收纯化DNA | 第29页 |
| 2.3.3 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.3.4 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.4 大肠杆菌菌体浓度测定 | 第30页 |
| 2.5 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第30页 |
| 2.6 蛋白浓度测定 | 第30页 |
| 2.7 甘油浓度测定 | 第30-32页 |
| 第三章 hIGF-1在大肠杆菌的重组表达与优化 | 第32-47页 |
| 3.1 引言 | 第32-34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.2.2 主要仪器与试剂 | 第34页 |
| 3.2.3 分子生物学基本操作 | 第34-35页 |
| 3.2.4 培养基 | 第35页 |
| 3.2.5 基因扩增与定点突变 | 第35页 |
| 3.2.6 克隆载体与表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.7 TrxA-hIGF-1融合蛋白的表达 | 第37页 |
| 3.2.8 表达条件优化 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第38-46页 |
| 3.3.1 TrxA-hIGF-1基因扩展与定点突变 | 第38-39页 |
| 3.3.2 克隆载体与表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 融合蛋白TrxA-hIGF-1的重组表达 | 第40-41页 |
| 3.3.4 培养基对融合蛋白TrxA-hIGF-1表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.5 诱导时机对融合蛋白TrxA-hIGF-1表达的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.6 诱导后培养温度对融合蛋白TrxA-hIGF-1表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.7 IPTG浓度对融合蛋白TrxA-hIGF-1表达的影响 | 第45页 |
| 3.3.8 诱导后培养时间对融合蛋白TrxA-hIGF-1表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 hIGF-1的分离、纯化与活性测定 | 第47-57页 |
| 4.1 引言 | 第47-48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 表达体系 | 第48页 |
| 4.2.2 试剂与溶液 | 第48页 |
| 4.2.3 发酵菌液处理 | 第48页 |
| 4.2.4 亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.5 PD-10脱盐柱替换肠激酶酶切缓冲液 | 第49-50页 |
| 4.2.6 分离成熟hIGF-1 | 第50页 |
| 4.2.7 hIGF-1细胞活性测定 | 第50-51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-55页 |
| 4.3.1 亲和层析纯化融合蛋白TrxA-hIGF-1 | 第51-52页 |
| 4.3.2 替换酶切缓冲液 | 第52-53页 |
| 4.3.3 肠激酶裂解融合蛋白TrxA-hIGF-1 | 第53页 |
| 4.3.4 亲和层析分离成熟hIGF-1 | 第53-54页 |
| 4.3.5 脱盐 | 第54页 |
| 4.3.6 成熟hIGF-1生物活性测定 | 第54-55页 |
| 4.4 小结 | 第55-57页 |
| 第五章 以甘油为碳源产hIGF-1的放大培养 | 第57-64页 |
| 5.1 引言 | 第57-58页 |
| 5.2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 表达体系 | 第58页 |
| 5.2.2 主要设备 | 第58页 |
| 5.2.3 培养基 | 第58-59页 |
| 5.2.4 培养方法 | 第59页 |
| 5.2.5 数据检测方法 | 第59-60页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第60-62页 |
| 5.3.1 不同甘油浓度对表达体系的影响 | 第60页 |
| 5.3.2 批次发酵 | 第60-61页 |
| 5.3.3 补料-分批发酵 | 第61-62页 |
| 5.4 小结 | 第62-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 结论 | 第64-65页 |
| 6.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
