| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 蛋白质体外复性研究 | 第13-16页 |
| 1.2.1 包涵体的形成 | 第13-15页 |
| 1.2.2 包涵体的分离和溶解 | 第15页 |
| 1.2.3 蛋白质复性机制 | 第15-16页 |
| 1.3 蛋白质二硫键的形成 | 第16-19页 |
| 1.3.1 二硫键的形成机制 | 第17-18页 |
| 1.3.2 体外复性过程中二硫键的形成及常用氧化还原体系 | 第18-19页 |
| 1.4 蛋白质复性常用方法 | 第19-21页 |
| 1.4.1 稀释和透析复性 | 第19-20页 |
| 1.4.2 层析复性 | 第20页 |
| 1.4.3 分子伴侣和折叠酶介导复性 | 第20页 |
| 1.4.4 折叠助剂协助复性 | 第20-21页 |
| 1.5 功能性高聚物在协助蛋白质体外复性中的应用 | 第21-27页 |
| 1.5.1 温敏型水凝胶PNIPAM | 第22-24页 |
| 1.5.2 带电荷的多聚物 | 第24-26页 |
| 1.5.3 巯基微球 | 第26-27页 |
| 1.6 本文研究思路及内容 | 第27-31页 |
| 1.6.1 溶菌酶 | 第27-28页 |
| 1.6.2 猪肝酯酶 | 第28-29页 |
| 1.6.3 研究思路 | 第29-31页 |
| 第二章 巯基微球的制备及协助溶菌酶体外复性 | 第31-51页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.3.1 巯基微球SG-DTT的制备 | 第33-34页 |
| 2.3.2 巯基微球SG-DTT的粒径及微球外观形态表征 | 第34页 |
| 2.3.3 巯基微球SG-DTT巯基负载量的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 溶菌酶的变性和复性 | 第35-36页 |
| 2.3.5 溶菌酶酶活测定 | 第36页 |
| 2.3.6 溶菌酶结构分析 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第37-49页 |
| 2.4.1 巯基微球SG-DTT的制备及表征 | 第37-40页 |
| 2.4.1.1 巯基微球的设计 | 第37-38页 |
| 2.4.1.2 微球SG的制备及表征 | 第38-39页 |
| 2.4.1.3 微球巯基的负载 | 第39-40页 |
| 2.4.2 氧化还原环境(GSSG/GSH浓度)及蛋白浓度对溶菌酶复性的影响 | 第40-43页 |
| 2.4.3 巯基微球SG-DTT协助溶菌酶复性 | 第43-48页 |
| 2.4.3.1 巯基负载量和微球加入量对溶菌酶复性的影响 | 第43-46页 |
| 2.4.3.2 温度对溶菌酶复性的影响 | 第46-47页 |
| 2.4.3.3 尿素浓度对溶菌酶复性的影响 | 第47页 |
| 2.4.3.4 巯基微球SG-DTT的多批次复性 | 第47-48页 |
| 2.4.4 复性溶菌酶的荧光光谱分析 | 第48-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 重组γ-猪肝酯酶包涵体的制备及稀释复性 | 第51-61页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第51-53页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第52-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 3.3.1 重组γ-PLE的发酵 | 第53页 |
| 3.3.2 重组γ-PLE包涵体的分离及洗涤纯化 | 第53页 |
| 3.3.3 重组γ-PLE包涵体的溶解变性和稀释复性 | 第53-54页 |
| 3.4 分析方法 | 第54-55页 |
| 3.4.1 还原性SDS-PAGE | 第54页 |
| 3.4.2 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第54-55页 |
| 3.4.3 猪肝酯酶的活性测定 | 第55页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 3.5.1 重组γ-PLE的发酵 | 第55-56页 |
| 3.5.2 重组γ-PLE包涵体的分离纯化和溶解 | 第56-57页 |
| 3.5.3 重组γ-PLE的稀释复性 | 第57-58页 |
| 3.5.4 重组γ-PLE的适宜氧化还原环境(GSSG/GSH浓度) | 第58-60页 |
| 3.6 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性 | 第61-71页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第61-62页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第61页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62页 |
| 4.3.1 巯基微球SG-DTT的制备及表征 | 第62页 |
| 4.3.2 重组γ-PLE纯化包涵体的制备及溶解变性 | 第62页 |
| 4.3.3 巯基微球SG-DTT协助重组γ-PLE包涵体复性 | 第62页 |
| 4.3.4 重组γ-PLE的活性测定 | 第62页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第62-69页 |
| 4.4.1 巯基微球SG-DTT的制备及表征 | 第62-63页 |
| 4.4.2 巯基微球SG-DTT协助γ-PLE包涵体复性 | 第63-65页 |
| 4.4.3 pH对SG-DTT微球协助γ-PLE复性的影响 | 第65页 |
| 4.4.4 温度对SG-DTT微球协助γ-PLE复性的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.5 尿素浓度对SG-DTT微球协助γ-PLE复性的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.6 巯基微球SG-DTT协助复性机理 | 第67-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第五章 结论与建议 | 第71-75页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 建议 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
