| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号及缩略语 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-33页 |
| 第一章 沙门氏菌病的研究进展 | 第15-25页 |
| 1 沙门氏菌简介 | 第15页 |
| 2 沙门氏菌病及其流行情况 | 第15-17页 |
| 3 沙门氏菌病诊断技术 | 第17-19页 |
| 3.1 病原分离与鉴定 | 第17页 |
| 3.2 免疫学方法 | 第17-18页 |
| 3.2.1 酶联免疫法(ELISA) | 第17-18页 |
| 3.2.2 玻片凝集试验 | 第18页 |
| 3.2.3 胶体金免疫层析法 | 第18页 |
| 3.3 基于核酸的检测方法 | 第18-19页 |
| 3.3.1 PCR技术 | 第18-19页 |
| 3.3.2 核酸探针 | 第19页 |
| 3.3.3 环介导等温扩增方法(LAMP) | 第19页 |
| 4 沙门氏菌疫苗现状 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第二章 猪痘病毒载体在疫苗开发中的应用 | 第25-33页 |
| 1 SPV概述 | 第25-26页 |
| 2 SPV基因组 | 第26-27页 |
| 3 重组猪痘病毒构建 | 第27-29页 |
| 4 SPV载体的应用 | 第29-30页 |
| 5 展望 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二篇 试验研究 | 第33-95页 |
| 第三章 基于外膜蛋白PAGC的沙门氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立与应用 | 第33-59页 |
| 1 材料与方法 | 第34-40页 |
| 1.1 试验材料 | 第34页 |
| 1.1.1 质粒、菌株和血清 | 第34页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第34页 |
| 1.2 沙门氏菌属内保守蛋白的筛选 | 第34-35页 |
| 1.3 目的基因pagC的克隆与原核表达 | 第35-37页 |
| 1.3.1 目的基因的扩增 | 第35页 |
| 1.3.2 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 1.3.3 目的蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| 1.3.4 目的蛋白的纯化与复性 | 第36-37页 |
| 1.4 目的蛋白PagC的验证 | 第37页 |
| 1.5 沙门氏菌外膜蛋白PagC间接ELISA检测方法的建立 | 第37-39页 |
| 1.5.1 最适抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第37-38页 |
| 1.5.2 封闭液种类的确定 | 第38页 |
| 1.5.3 待检血清反应时间的确定 | 第38页 |
| 1.5.4 酶标二抗反应浓度及时间的确定 | 第38-39页 |
| 1.5.5 临界值的确定 | 第39页 |
| 1.5.6 特异性试验 | 第39页 |
| 1.5.7 重复性试验 | 第39页 |
| 1.5.8 符合性比较 | 第39页 |
| 1.6 鸡白痢沙门氏菌标准阴性血清和标准阳性血清的制备及评价 | 第39-40页 |
| 1.7 临床样品的血清流行病学调查 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-52页 |
| 2.1 沙门氏菌属内保守蛋白的选择及同源性分析 | 第40-41页 |
| 2.2 目的基因pagC的克隆与原核表达 | 第41-45页 |
| 2.2.1 目的基因的扩增 | 第41-42页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.2.3 目的蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.2.4 目的蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 2.3 目的蛋白PagC的验证 | 第45页 |
| 2.4 沙门氏菌外膜蛋白PagC间接ELISA检测方法的建立 | 第45-51页 |
| 2.4.1 抗原最适包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第45-46页 |
| 2.4.2 最佳封闭液种类 | 第46-47页 |
| 2.4.3 待检血清的反应时间 | 第47页 |
| 2.4.4 最适酶标二抗反应浓度及时间 | 第47-48页 |
| 2.4.5 临界值的确定 | 第48页 |
| 2.4.6 特异性试验 | 第48-49页 |
| 2.4.7 重复性试验 | 第49-50页 |
| 2.4.8 符合性比较 | 第50-51页 |
| 2.5 鸡白痢标准阴性血清、阳性血清的制备及评价 | 第51页 |
| 2.6 临床样品的血清流行病学调查 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第四章 表达沙门氏菌外膜蛋白L(OMPL)的重组猪痘病毒活载体疫苗的研制及免疫评价 | 第59-77页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| 1.1 试验材料 | 第60-61页 |
| 1.1.1 质粒、细胞和菌毒株 | 第60页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第60-61页 |
| 1.1.3 引物设计 | 第61页 |
| 1.2 重组猪痘病毒转移载体的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 1.2.1 沙门氏菌ompL基因的扩增 | 第61页 |
| 1.2.2 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL的构建 | 第61-62页 |
| 1.2.3 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL的鉴定 | 第62页 |
| 1.3 重组猪痘病毒rSPV-OmpL的构建与鉴定 | 第62-64页 |
| 1.3.1 重组猪痘病毒rSPV-OmpL的构建 | 第62-63页 |
| 1.3.2 重组猪痘病毒rSPV-OmpL的纯化 | 第63页 |
| 1.3.3 重组猪痘病毒rSPV-OmpL的鉴定 | 第63-64页 |
| 1.4 重组猪痘病毒rSPV-OmpL遗传稳定性试验 | 第64页 |
| 1.5 小鼠免疫保护试验 | 第64页 |
| 1.6 OmpL特异性抗体的检测 | 第64-65页 |
| 1.7 细胞因子检测 | 第65页 |
| 1.8 统计学分析 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-71页 |
| 2.1 沙门氏菌ompL基因的PCR扩增 | 第65-66页 |
| 2.2 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL的构建及鉴定 | 第66-67页 |
| 2.3 重组猪痘病毒rSPV-OmpL的鉴定 | 第67-69页 |
| 2.4 重组猪痘病毒rSPV-OmpL遗传稳定性测定 | 第69页 |
| 2.5 OmpL特异性抗体反应 | 第69-70页 |
| 2.6 细胞因子检测 | 第70页 |
| 2.7 小鼠攻毒保护试验 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 第五章 共表达沙门氏菌OMPL和FLIC的重组猪痘病毒的构建及其在小鼠模型中的保护效率研究 | 第77-95页 |
| 1 材料与方法 | 第78-82页 |
| 1.1 试验材料 | 第78-79页 |
| 1.1.1 质粒、细胞和菌毒株 | 第78页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第78页 |
| 1.1.3 引物设计 | 第78-79页 |
| 1.2 重组猪痘病毒转移载体的构建与鉴定 | 第79页 |
| 1.2.1 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL-FliC的构建 | 第79页 |
| 1.2.2 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL-FliC的鉴定 | 第79页 |
| 1.3 重组猪痘病毒rSPV-OF的构建与鉴定 | 第79-81页 |
| 1.3.1 重组猪痘病毒rSPV-OF的构建及纯化 | 第79-80页 |
| 1.3.2 重组猪痘病毒rSPV-OF的鉴定 | 第80-81页 |
| 1.4 重组猪痘病毒rSPV-OF遗传稳定性试验 | 第81页 |
| 1.5 小鼠免疫保护试验 | 第81页 |
| 1.6 OmpL和FliC特异性抗体的检测 | 第81-82页 |
| 1.7 细胞因子检测 | 第82页 |
| 1.8 统计学分析 | 第82页 |
| 2 结果 | 第82-90页 |
| 2.1 沙门氏菌目的基因的PCR扩增 | 第82-83页 |
| 2.2 重组猪痘病毒转移载体pUSG11/P28-OmpL-FliC的构建及鉴定 | 第83-85页 |
| 2.3 重组猪痘病毒rSPV-OF的纯化 | 第85页 |
| 2.4 重组猪痘病毒rSPV-OF的鉴定 | 第85-87页 |
| 2.5 重组猪痘病毒rSPV-OF的遗传稳定性测定 | 第87页 |
| 2.6 OmpL和FliC特异性抗体反应 | 第87-88页 |
| 2.7 细胞因子检测 | 第88-89页 |
| 2.8 小鼠攻毒保护试验 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
