| 英文缩写词表 | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 酵母细胞壁组成和结构 | 第10-14页 |
| 1.1.1 酵母细胞壁组成成分 | 第10-12页 |
| 1.1.2 酵母细胞壁结构 | 第12-14页 |
| 1.2 酵母表面展示技术CALB研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 酵母表面展示技术的简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 多策略优化酵母表面展示技术 | 第15页 |
| 1.2.3 CALB在酵母中表面展示的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 GAS1基因和MNN2基因简介 | 第17-22页 |
| 1.3.1 GAS1基因研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.2 MNN2基因研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4 本课题研究意义和内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 本课题研究意义 | 第22页 |
| 1.4.2 本课题研究内容 | 第22-23页 |
| 1.4.3 本课题研究目的 | 第23-24页 |
| 第二章 毕赤酵母GAS1缺失对表面展示效率影响 | 第24-59页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料与设备 | 第24-28页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 菌株、质粒和引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 分子实验试剂及化学试剂 | 第26页 |
| 2.2.4 抗体 | 第26-27页 |
| 2.2.5 培养基与缓冲液 | 第27-28页 |
| 2.3 实验技术路线 | 第28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-50页 |
| 2.4.1 菌株的活化与培养 | 第28-29页 |
| 2.4.2 菌种的保种方法 | 第29页 |
| 2.4.3 重组质粒的构建 | 第29-34页 |
| 2.4.4 毕赤酵母感受态细胞制备及电转化 | 第34-36页 |
| 2.4.5 重组毕赤酵母菌株的鉴定和三丁酸甘油酯平板筛选 | 第36页 |
| 2.4.6 重组毕赤酵母菌株的诱导发酵 | 第36页 |
| 2.4.7 脂肪酶酶活检测方法（pNPB） | 第36-38页 |
| 2.4.8 普通同源重组介导的同源重组敲除方法 | 第38-41页 |
| 2.4.9 流式细胞仪分析检测荧光量 | 第41-42页 |
| 2.4.10 RT-PCR转录水平鉴定 | 第42-45页 |
| 2.4.11 脂肪酶活性中心滴定方法测定载酶量 | 第45-47页 |
| 2.4.12 细胞壁多糖提取方法 | 第47-50页 |
| 2.4.13 细胞壁干扰剂平板分析法 | 第50页 |
| 2.4.14 苯胺蓝法测β-1，3-葡聚糖含量 | 第50页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 2.5.1 GAS1基因敲除菌株构建 | 第50-52页 |
| 2.5.2 GAS1缺失菌株中CALB转录水平鉴定 | 第52-53页 |
| 2.5.3 表面展示效率的测定结果 | 第53-54页 |
| 2.5.4 细胞壁组分和结构的改变 | 第54-56页 |
| 2.6 本章小结 | 第56-59页 |
| 第三章 毕赤酵母甘露糖代谢途径中MNN2基因对展示效率影响 | 第59-71页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料与设备 | 第59-61页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第59页 |
| 3.2.2 菌株、质粒和引物设计 | 第59-60页 |
| 3.2.3 分子实验试剂及化学试剂 | 第60页 |
| 3.2.4 抗体 | 第60页 |
| 3.2.5 培养基和缓冲液配置 | 第60-61页 |
| 3.3 实验技术路线 | 第61页 |
| 3.4 实验方法 | 第61-62页 |
| 3.4.1 同源重组介导构建敲除盒子 | 第61页 |
| 3.4.2 过表达质粒pPICZA/Aox-MNN2的构建 | 第61-62页 |
| 3.4.3 RT-PCR表达水平的鉴定 | 第62页 |
| 3.4.4 展示CALB酶活的检测方法（pNPB法） | 第62页 |
| 3.4.5 流式细胞仪分析 | 第62页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 3.5.1 MNN2基因缺失和过表达重组展示菌株构建 | 第62-63页 |
| 3.5.2 RT-PCR鉴定CALB转录水平 | 第63-64页 |
| 3.5.3 MNN2基因对毕赤酵母表面展示效率的影响 | 第64-66页 |
| 3.5.4 酵母细胞结构和多糖含量结构检测 | 第66-68页 |
| 3.6 本章小结 | 第68-71页 |
| 第四章 主要结论及后续工作展望 | 第71-73页 |
| 4.1 主要结论 | 第71-72页 |
| 4.2 本研究创新之处 | 第72页 |
| 4.3 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 作者在攻读硕士学位期间发表论文的目录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第78页 |
