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甲型流感病毒与宿主细胞相互作用的动态蛋白质组学研究

前言第4-6页
中文摘要第6-7页
Abstract第7-8页
英文缩写词表第12-13页
第一章 绪论第13-23页
    1.1 甲型流感病毒及与宿主相互作用的研究进展第13-16页
        1.1.1 流感病毒的主要蛋白第13-15页
        1.1.2 目前流感病毒与宿主相互作用的研究进展第15-16页
    1.2 蛋白质组学及其在流感病毒研究中的进展第16-18页
        1.2.1 蛋白质组学概述第16-17页
        1.2.2 蛋白质组学在流感病毒研究中的应用及其局限性第17-18页
    1.3 生物正交反应概述及应用第18-23页
        1.3.1 生物正交反应的特点第18-20页
        1.3.2 生物正交反应的应用第20-23页
第二章 H7N9 NP蛋白与宿主相互作用的蛋白质组学研究第23-37页
    2.1 实验材料第23页
    2.2 实验方法第23-27页
        2.2.1 H7N9 NP质粒构建、扩增第23-24页
        2.2.2 293T细胞培养第24页
        2.2.3 pCMV-NP质粒转染 293T细胞第24页
        2.2.4 免疫共沉淀第24-25页
        2.2.5 SDS-PAGE电泳与免疫印迹第25-26页
        2.2.6 缓冲液替换及胰蛋白酶裂解第26页
        2.2.7 Nano-LC-MS/MS质谱检测及数据检索第26-27页
        2.2.8 生物信息学分析及Western Blot实验验证第27页
    2.3 实验结果与讨论第27-35页
        2.3.1 NP蛋白表达及免疫共沉淀第27-29页
        2.3.2 质谱鉴定与NP蛋白相互作用的宿主蛋白第29-30页
        2.3.3 宿主蛋白赖氨酸乙酰化修饰第30-32页
        2.3.4 生物信息学分析及结果验证第32-35页
    2.4 小结第35-37页
第三章 生物正交反应及检测方法的建立第37-48页
    3.1 实验材料第37页
    3.2 实验方法第37-42页
        3.2.1 293T细胞的培养第37-38页
        3.2.2 细胞影像学分析方法的建立(细胞水平标记)第38-39页
        3.2.3 蛋白水平标记方法的建立第39-40页
        3.2.4 新生成蛋白ELISA检测方法的建立第40-41页
        3.2.5 新生成蛋白免疫印迹检测方法的建立第41页
        3.2.6 新生成蛋白质谱检测方法的建立第41-42页
    3.3 实验结果与讨论第42-47页
        3.3.1 细胞影像学分析方法建立结果第42-43页
        3.3.2 蛋白水平生物正交反应标记荧光分子第43-44页
        3.3.3 新生成蛋白ELISA检测方法的建立结果第44页
        3.3.4 新生成蛋白免疫印迹检测方法的建立结果第44-45页
        3.3.5 PD-10 除盐柱富集条件探索结果第45页
        3.3.6 亲和纯化方法条件确立结果第45-46页
        3.3.7 新生成蛋白质谱检测结果第46-47页
    3.4 小结第47-48页
第四章 流感病毒感染及非天然氨基酸标记条件优化第48-56页
    4.1 实验材料第48页
    4.2 实验方法第48-50页
        4.2.1 甲型流感病毒H1N1扩增第48页
        4.2.2 血球凝集(HA)试验与TCID_(50)测定第48-49页
        4.2.3 非天然氨基酸AHA处理Vero细胞时间的确定第49-50页
    4.3 实验结果与讨论第50-55页
        4.3.1 流感病毒H1N1感染剂量确定第50-51页
        4.3.2 细胞水平观察AHA处理Vero不同时间新生蛋白情况第51-52页
        4.3.3 ELISA检测AHA处理Vero细胞不同时间新生蛋白情况第52-54页
        4.3.4 质谱检测结果第54-55页
    4.4 小结第55-56页
第五章 H1N1感染Vero细胞及新生成蛋白的检测与分析第56-67页
    5.1 实验材料第56页
    5.2 实验方法第56-58页
        5.2.1 H1N1感染Vero细胞显微成像第56-57页
        5.2.2 H1N1感染Vero细胞获得新生成蛋白质组及检测分析第57-58页
    5.3 实验结果与讨论第58-66页
        5.3.1 H1N1感染Vero细胞系显微成像结果第58-59页
        5.3.2 ELISA检测H1N1感染Vero不同时间后新生成蛋白的变化第59页
        5.3.3 免疫印迹方法检测部分时间点新生成蛋白情况第59-60页
        5.3.4 蛋白质组学分析结果第60-66页
    5.4 小结第66-67页
第六章 结论第67-68页
参考文献第68-75页
附录第75-90页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第90-91页
致谢第91页

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