前言 | 第4-6页 |
中文摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩写词表 | 第12-13页 |
第一章 绪论 | 第13-23页 |
1.1 甲型流感病毒及与宿主相互作用的研究进展 | 第13-16页 |
1.1.1 流感病毒的主要蛋白 | 第13-15页 |
1.1.2 目前流感病毒与宿主相互作用的研究进展 | 第15-16页 |
1.2 蛋白质组学及其在流感病毒研究中的进展 | 第16-18页 |
1.2.1 蛋白质组学概述 | 第16-17页 |
1.2.2 蛋白质组学在流感病毒研究中的应用及其局限性 | 第17-18页 |
1.3 生物正交反应概述及应用 | 第18-23页 |
1.3.1 生物正交反应的特点 | 第18-20页 |
1.3.2 生物正交反应的应用 | 第20-23页 |
第二章 H7N9 NP蛋白与宿主相互作用的蛋白质组学研究 | 第23-37页 |
2.1 实验材料 | 第23页 |
2.2 实验方法 | 第23-27页 |
2.2.1 H7N9 NP质粒构建、扩增 | 第23-24页 |
2.2.2 293T细胞培养 | 第24页 |
2.2.3 pCMV-NP质粒转染 293T细胞 | 第24页 |
2.2.4 免疫共沉淀 | 第24-25页 |
2.2.5 SDS-PAGE电泳与免疫印迹 | 第25-26页 |
2.2.6 缓冲液替换及胰蛋白酶裂解 | 第26页 |
2.2.7 Nano-LC-MS/MS质谱检测及数据检索 | 第26-27页 |
2.2.8 生物信息学分析及Western Blot实验验证 | 第27页 |
2.3 实验结果与讨论 | 第27-35页 |
2.3.1 NP蛋白表达及免疫共沉淀 | 第27-29页 |
2.3.2 质谱鉴定与NP蛋白相互作用的宿主蛋白 | 第29-30页 |
2.3.3 宿主蛋白赖氨酸乙酰化修饰 | 第30-32页 |
2.3.4 生物信息学分析及结果验证 | 第32-35页 |
2.4 小结 | 第35-37页 |
第三章 生物正交反应及检测方法的建立 | 第37-48页 |
3.1 实验材料 | 第37页 |
3.2 实验方法 | 第37-42页 |
3.2.1 293T细胞的培养 | 第37-38页 |
3.2.2 细胞影像学分析方法的建立(细胞水平标记) | 第38-39页 |
3.2.3 蛋白水平标记方法的建立 | 第39-40页 |
3.2.4 新生成蛋白ELISA检测方法的建立 | 第40-41页 |
3.2.5 新生成蛋白免疫印迹检测方法的建立 | 第41页 |
3.2.6 新生成蛋白质谱检测方法的建立 | 第41-42页 |
3.3 实验结果与讨论 | 第42-47页 |
3.3.1 细胞影像学分析方法建立结果 | 第42-43页 |
3.3.2 蛋白水平生物正交反应标记荧光分子 | 第43-44页 |
3.3.3 新生成蛋白ELISA检测方法的建立结果 | 第44页 |
3.3.4 新生成蛋白免疫印迹检测方法的建立结果 | 第44-45页 |
3.3.5 PD-10 除盐柱富集条件探索结果 | 第45页 |
3.3.6 亲和纯化方法条件确立结果 | 第45-46页 |
3.3.7 新生成蛋白质谱检测结果 | 第46-47页 |
3.4 小结 | 第47-48页 |
第四章 流感病毒感染及非天然氨基酸标记条件优化 | 第48-56页 |
4.1 实验材料 | 第48页 |
4.2 实验方法 | 第48-50页 |
4.2.1 甲型流感病毒H1N1扩增 | 第48页 |
4.2.2 血球凝集(HA)试验与TCID_(50)测定 | 第48-49页 |
4.2.3 非天然氨基酸AHA处理Vero细胞时间的确定 | 第49-50页 |
4.3 实验结果与讨论 | 第50-55页 |
4.3.1 流感病毒H1N1感染剂量确定 | 第50-51页 |
4.3.2 细胞水平观察AHA处理Vero不同时间新生蛋白情况 | 第51-52页 |
4.3.3 ELISA检测AHA处理Vero细胞不同时间新生蛋白情况 | 第52-54页 |
4.3.4 质谱检测结果 | 第54-55页 |
4.4 小结 | 第55-56页 |
第五章 H1N1感染Vero细胞及新生成蛋白的检测与分析 | 第56-67页 |
5.1 实验材料 | 第56页 |
5.2 实验方法 | 第56-58页 |
5.2.1 H1N1感染Vero细胞显微成像 | 第56-57页 |
5.2.2 H1N1感染Vero细胞获得新生成蛋白质组及检测分析 | 第57-58页 |
5.3 实验结果与讨论 | 第58-66页 |
5.3.1 H1N1感染Vero细胞系显微成像结果 | 第58-59页 |
5.3.2 ELISA检测H1N1感染Vero不同时间后新生成蛋白的变化 | 第59页 |
5.3.3 免疫印迹方法检测部分时间点新生成蛋白情况 | 第59-60页 |
5.3.4 蛋白质组学分析结果 | 第60-66页 |
5.4 小结 | 第66-67页 |
第六章 结论 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-75页 |
附录 | 第75-90页 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第90-91页 |
致谢 | 第91页 |