| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 论文综述 | 第14-25页 |
| 一 真菌次级代谢产物及其生物合成基因简介 | 第14-15页 |
| 二 真菌次级代谢生物合成基因的研究程序及方法 | 第15-25页 |
| 1 生物合成基因簇的预测 | 第15-17页 |
| 1.1 生物合成核心酶的预测 | 第16页 |
| 1.2 比较基因组分析 | 第16-17页 |
| 1.3 生物信息学软件分析 | 第17页 |
| 2. 生物合成基因簇的验证 | 第17-25页 |
| 2.1 基因敲除 | 第17-20页 |
| 2.1.1 CaCl_2/PEG介导的原生质体转化 | 第18-19页 |
| 2.1.2 农杆菌介导的转化技术 | 第19-20页 |
| 2.2 异源表达 | 第20-25页 |
| 2.2.1 生物合成途径的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.2 异源宿主的选择 | 第22-23页 |
| 2.2.3 异源宿主的调节和改造 | 第23-25页 |
| 第二章 少孢节丛孢中7个生物合成基因的筛选 | 第25-38页 |
| 引言 | 第25-27页 |
| 一 预测分析方法 | 第27页 |
| 二 预测结果 | 第27-36页 |
| 1 少孢节丛孢中生物合成基因 | 第27页 |
| 2 本论文研究的7个生物合成基因的筛选及分析 | 第27-36页 |
| 2.1 基因筛选 | 第27-30页 |
| 2.2 所选基因系统发育树分析 | 第30-36页 |
| 三 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 少孢节丛孢中7个生物合成基因敲除菌株构建 | 第38-68页 |
| 引言 | 第38页 |
| 一 材料方法 | 第38-55页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| 1.1 菌株及质粒 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂及试剂盒 | 第38-39页 |
| 1.3 仪器 | 第39页 |
| 1.4 培养基及试剂 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-55页 |
| 2.1 引物设计 | 第40-43页 |
| 2.2 敲除载体构建 | 第43-46页 |
| 2.2.1 质粒选择 | 第43-44页 |
| 2.2.2 片段扩增及纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.3 上下游片段插入载体 | 第45-46页 |
| 2.3 原生质体制备和转化 | 第46-51页 |
| 2.3.1 原生质体替换原理 | 第46-50页 |
| 2.3.2 原生质体制备 | 第50-51页 |
| 2.3.3 原生质体转化 | 第51页 |
| 2.4 转化子验证 | 第51-55页 |
| 2.4.1 PCR验证 | 第51页 |
| 2.4.2 Southern Blot验证 | 第51-55页 |
| 二 实验结果 | 第55-66页 |
| 1. 敲除载体构建 | 第55-61页 |
| 1.1 上下游片段扩增 | 第55-56页 |
| 1.2 上下游片段插入 | 第56-60页 |
| 1.2.1 43g828上下游片段连入载体 | 第56页 |
| 1.2.2 43g287上下游片段连入载体 | 第56-57页 |
| 1.2.3 43g400及其余四个基因上下游片段连入载体 | 第57-60页 |
| 1.3 全长验证 | 第60-61页 |
| 2. 突变菌株筛选验证 | 第61-66页 |
| 2.1 转化子PCR验证 | 第61-65页 |
| 2.2 Southern Blot验证 | 第65-66页 |
| 三 总结与讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 少孢节丛孢中7生物合成基因突变菌株与野生菌株表型比较和分析 | 第68-86页 |
| 引言 | 第68页 |
| 一 材料和方法 | 第68-70页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第68-69页 |
| 2 实验方法 | 第69-70页 |
| 2.1 菌落形态和菌丝菌落直径观察 | 第69页 |
| 2.2 产孢量统计 | 第69页 |
| 2.3 线虫诱导实验 | 第69-70页 |
| 2.3.1 线虫培养和富集 | 第69-70页 |
| 2.3.2 线虫诱导实验 | 第70页 |
| 二 实验结果 | 第70-83页 |
| 1 菌落形态及菌落直径生长比较 | 第70-75页 |
| 2 突变菌株与野生菌株生产孢比较 | 第75-76页 |
| 3 突变菌株与野生菌株捕食线虫能力比较 | 第76-83页 |
| 三 小结与讨论 | 第83-86页 |
| 第五章 少孢节丛孢中7个生物合成基因突变株次级代谢产物化学图谱分析 | 第86-104页 |
| 引言 | 第86页 |
| 一 实验材料和方法 | 第86-88页 |
| 1 材料 | 第86-87页 |
| 1.1 实验菌株 | 第86页 |
| 1.2 培养基和试剂 | 第86页 |
| 1.3 器材 | 第86-87页 |
| 2 方法 | 第87-88页 |
| 2.1 菌株发酵 | 第87页 |
| 2.2 样品处理 | 第87-88页 |
| 2.3 高效液相色谱(HPLC)检测 | 第88页 |
| 2.4 气相色谱-质谱(GC-MS)检测 | 第88页 |
| 二 实验结果 | 第88-101页 |
| 1 野生菌株与突变菌株Δ43g828代谢产物化学检测分析 | 第88-91页 |
| 2 野生菌株与突变菌株Δ43g287代谢产物化学检测分析 | 第91-92页 |
| 3 野生菌株与突变菌株Δ43g400代谢产物化学检测分析 | 第92-95页 |
| 4 野生菌株与突变菌株Δ43g381代谢产物化学检测分析 | 第95-96页 |
| 5 野生菌株与突变菌株Δ78g577代谢产物化学检测分析 | 第96-97页 |
| 6 野生菌株与突变菌株Δ97g233代谢产物化学检测分析 | 第97-99页 |
| 7 野生菌株与突变菌株Δ97g384羽代谢产物化学检测分析 | 第99-101页 |
| 三 小结与讨论 | 第101-104页 |
| 第六章 基因表达差异分析 | 第104-114页 |
| 引言 | 第104页 |
| 一 材料和方法 | 第104-105页 |
| 1 实验材料 | 第104页 |
| 1.1 实验菌株 | 第104页 |
| 1.2 培养基 | 第104页 |
| 1.3 器材 | 第104页 |
| 2 实验方法 | 第104-105页 |
| 2.1 菌株培养 | 第104-105页 |
| 2.2 样品制备 | 第105页 |
| 二 实验结果 | 第105-112页 |
| 1 突变株Δ43g828与野生菌株基因表达差异分析 | 第105-108页 |
| 2 突变株Δ97g384因与野生菌株表达差异分析 | 第108-112页 |
| 三 小结与讨论 | 第112-114页 |
| 全文总结 | 第114-118页 |
| 附录 | 第118-123页 |
| 参考文献 | 第123-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
