| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 内质网应激与疾病 | 第14-25页 |
| 1 内质网应激 | 第14-19页 |
| ·内质网的结构特征 | 第14页 |
| ·内质网应激的产生 | 第14-15页 |
| ·未折叠蛋白反应（UPR） | 第15-18页 |
| ·信号转导蛋白PERK 介导的信号通路 | 第15页 |
| ·ATF6 介导的信号通路 | 第15-18页 |
| ·IRE1 介导的信号通路 | 第18页 |
| ·内质网相关性蛋白降解途径(ERAD) | 第18-19页 |
| 2 内质网应激与细胞凋亡 | 第19-22页 |
| ·细胞凋亡 | 第19-21页 |
| ·细胞凋亡的外在途径 | 第19-20页 |
| ·细胞凋亡的内在途径 | 第20页 |
| ·细胞凋亡的过程 | 第20-21页 |
| ·生长抑制DNA 损伤基因(CHOP/(GADD153) | 第21-22页 |
| ·CHOP 的结构与功能 | 第21-22页 |
| ·CHOP 在细胞凋亡中的作用 | 第22页 |
| 3 内质网应激与疾病的关系 | 第22-25页 |
| ·神经系统变性疾病 | 第23页 |
| ·糖尿病 | 第23页 |
| ·病毒感染性疾病 | 第23-24页 |
| ·肿瘤 | 第24-25页 |
| 第二章 ZHANGFEI 基因的研究进展 | 第25-37页 |
| 1 ZHANGFEI 和 LUMAN 基因的发现 | 第25-31页 |
| ·LUMAN/CRE83 | 第25-28页 |
| ·CREB/ATF 超蛋白家族 | 第25-26页 |
| ·Luman 的结构和细胞定位 | 第26页 |
| ·Luman 的激活 | 第26-27页 |
| ·Luman 在未折叠蛋白应答反应中的作用 | 第27页 |
| ·与Luman 相关联的蛋白 | 第27-28页 |
| ·ZHANGFEI/CREBZF | 第28-31页 |
| ·Zhangfei 的结构和DNA 结合的特性 | 第28-29页 |
| ·Zhangfei 的生物学功能 | 第29-31页 |
| 2 相关研究方法的原理 | 第31-33页 |
| ·WESTERN BLOTTING 的原理 | 第31-32页 |
| ·双荧光酶检测系统的原理 | 第32-33页 |
| ·染色体免疫共沉淀的原理 | 第33页 |
| 3 存在问题 | 第33-37页 |
| 第三章 ZHANGFEI 启动子克隆及其相关载体的鉴定 | 第37-50页 |
| 1 材料与方法 | 第37-44页 |
| ·试验材料 | 第37-39页 |
| ·血样 | 第37页 |
| ·载体 | 第37-38页 |
| ·试验试剂 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38-39页 |
| ·主要试剂的配制 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-44页 |
| ·Zhangfei 基因的结构分析 | 第39页 |
| ·基因组DNA、细胞总RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第39-40页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第40页 |
| ·Zhangfei 启动子克隆与载体构建 | 第40-42页 |
| ·Zhangfei 启动子定点突变载体的构建 | 第42-43页 |
| ·Zhangfei 4 种不同亚型表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| ·CHOP 启动子克隆的相关载体的鉴定 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·ZHANGFEI 基因序列结构分析 | 第44-45页 |
| ·犬基因组DNA 的提取 | 第45页 |
| ·不同长度的ZHANGFEI 启动子构建 | 第45-46页 |
| ·四种不同ZHANGFEI 亚型表达载体的酶切鉴定结果 | 第46页 |
| ·不同长度CHOP 启动子的酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| ·ZHANGFEI 相关载体克隆的设计策略 | 第47页 |
| ·关于载体克隆的策略 | 第47-48页 |
| ·关于序列突变 | 第48-49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 氨基酸缺失通过启动子区的AARE 诱导ZHANGFEI 表达 | 第50-62页 |
| 1 材料和方法 | 第50-54页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·载体 | 第50页 |
| ·细胞系 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50-51页 |
| ·仪器设备 | 第51页 |
| ·氨基酸缺失培养液的制备 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·细胞培养和转染 | 第51-52页 |
| ·细胞总RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第52页 |
| ·实时定量PCR 检测不同细胞系Zhangfei mRNA 的水平 | 第52-53页 |
| ·双荧光酶检测 | 第53页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第53页 |
| ·双荧光酶检测程序 | 第53页 |
| ·Zhangfei 启动子基本转录活性的检测 | 第53-54页 |
| ·Tg 和Tm 对 Zhangfei 启动子转录活性的影响 | 第54页 |
| ·单一氨基酸缺失对Zhangfei 启动子转录活性的影响 | 第54页 |
| ·Zhangfei 启动子区AARE 的鉴定方法 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-59页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·ZHANGFEI 在不同细胞中的表达水平检测 | 第55页 |
| ·ZHANGFEI 启动子活性检测结果 | 第55-56页 |
| ·ZHANGFEI 基因启动子5' 侧翼区对TG 和TM 处理的应答效果活性分析 | 第56-57页 |
| ·单一氨基酸缺失可以增强ZHANGFEI 启动子的转录活性 | 第57-59页 |
| ·ZHANGFEI 启动子上游区域AARE 的鉴定 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·氨基酸缺失通过AARE 诱导ZHANGFEI 基因的转录 | 第59-60页 |
| ·关于MDCK 细胞的培养 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 ZHANGFEI 通过C/EBP-ATF 激活CHOP 表达并诱导细胞凋亡 | 第62-80页 |
| 1 材料与方法 | 第62-68页 |
| ·试验材料 | 第62-64页 |
| ·载体 | 第62页 |
| ·细胞系 | 第62页 |
| ·抗体 | 第62页 |
| ·试剂 | 第62-63页 |
| ·主要试验试剂的配制 | 第63页 |
| ·试验仪器 | 第63-64页 |
| ·试验方法 | 第64-68页 |
| ·Hela 细胞的转染 | 第64页 |
| ·细胞裂解液的制备和蛋白浓度测定 | 第64-65页 |
| ·蛋白免疫印迹（Western blotting） | 第65-66页 |
| ·Zhangfei 4 种蛋白亚型的检测 | 第66页 |
| ·内源性Zhangfei 在内质网应激状态下表达水平的检测 | 第66页 |
| ·内质网应激状态下Zhangfei 下游基因CHOP 的表达检测 | 第66-68页 |
| ·lZF-IFFFR 和sZF-IFFFR 引起细胞凋亡的检测 | 第68页 |
| 2 结果分析 | 第68-75页 |
| ·ZHANGFEI 通过选择性剪切和翻译起始产生4 种不同的蛋白亚型 | 第68-69页 |
| ·内质网应激能够诱导SZF-IFFFR 表达 | 第69-70页 |
| ·SZF-IFFFR 调节内质网应激介导的细胞凋亡基因CHOP 的表达 | 第70-71页 |
| ·CHOP 启动子中的C/EBP-ATF 元件能够应答 SZF-IFFFR 的诱导 | 第71-74页 |
| ·LZF-IFFFR 和 SZF-IFFFR 可能通过诱导CHOP 的表达而引起细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-79页 |
| ·关于ZHANGFEI 蛋白亚型 | 第75-76页 |
| ·LZF-IFFFR 或SZF-IFFFR 可诱导下游基因CHOP 的表达 | 第76-77页 |
| ·在内质网应激时CHOP 通过C/EBP–ATF 元件诱导细胞凋亡 | 第77-78页 |
| ·在哺乳动物的UPR 途径中由SZF-IFFFR 介导的CHOP 工作模型 | 第78-79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 进一步研究的方向 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附录一 试剂的配制 | 第92-93页 |
| 附录二：PEG PLASMID PURIFICATION | 第93-95页 |
| 附录三：CHROMATIN IMMUNOPRECIPITATION | 第95-97页 |
| 缩略词 | 第97-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
