| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 布鲁氏菌疫情及危害 | 第12-15页 |
| 1.1.1 世界布鲁氏菌疫情 | 第12-13页 |
| 1.1.2 我国布鲁氏菌疫情 | 第13-14页 |
| 1.1.3 内蒙古布鲁氏菌疫情 | 第14-15页 |
| 1.2 布鲁氏菌的病原学特征 | 第15-17页 |
| 1.2.1 布鲁氏菌形态及生化特征 | 第15页 |
| 1.2.2 布鲁氏菌的基因组 | 第15-16页 |
| 1.2.3 布鲁氏菌的类型 | 第16页 |
| 1.2.4 布鲁氏菌的致病力及毒力基因 | 第16-17页 |
| 1.3 布鲁氏菌的诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.3.1 血清学诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.3.2 分子生物学诊断方法 | 第18页 |
| 1.4 布鲁氏菌的抗原 | 第18-20页 |
| 1.4.1 第一组外膜蛋白 | 第19页 |
| 1.4.2 第二组外膜蛋白 | 第19页 |
| 1.4.3 第三组外膜蛋白 | 第19-20页 |
| 1.5 2，4-二氧四氢蝶淀合成酶 BLS | 第20-22页 |
| 1.6 布鲁氏菌的疫苗 | 第22-25页 |
| 1.6.1 弱毒活菌苗 | 第22-23页 |
| 1.6.2 灭活疫苗 | 第23-24页 |
| 1.6.3 组分苗 | 第24页 |
| 1.6.4 基因工程疫苗 | 第24-25页 |
| 1.7 研究内容及意义 | 第25-26页 |
| 2 实验内容 | 第26-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 常用的试剂和试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.2 实验菌株及载体 | 第26-27页 |
| 2.2 实验配方 | 第27-30页 |
| 2.3 主要实验器材及仪器 | 第30-31页 |
| 2.3.1 主要实验器材 | 第30页 |
| 2.3.2 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.4 实验方法 | 第31-49页 |
| 2.4.1 提取 pET28a 载体质粒 | 第31-32页 |
| 2.4.2 感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.4.3 目的基因 omp31 的克隆 | 第32-35页 |
| 2.4.4 目的基因 omp31_(193-227)的克隆 | 第35-38页 |
| 2.4.5 目的基因 bls 的克隆 | 第38-40页 |
| 2.4.6 融合目的基因 omp31_(193-227)bls 的克隆 | 第40-43页 |
| 2.4.7 重组蛋白 rOmp31 的诱导表达及纯化 | 第43-45页 |
| 2.4.8 重组蛋白 rBLS 的诱导表达及纯化 | 第45页 |
| 2.4.9 重组蛋白 rOmp31BLS 的诱导表达及纯化 | 第45页 |
| 2.4.10 重组表达蛋白的 ELSIA 检测 | 第45-47页 |
| 2.4.11 重组表达蛋白的琼脂糖扩散 | 第47-48页 |
| 2.4.12 重组表达蛋白凝集实验 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-69页 |
| 3.1 omp31 基因测序结果 | 第49页 |
| 3.2 Omp31 蛋白质分子的结构预测 | 第49-53页 |
| 3.2.1 软件在线预测 | 第50页 |
| 3.2.2 DNASTAR 生物软件预测与分析 | 第50-53页 |
| 3.3 pET28aomp31 重组质粒的构建结果 | 第53-55页 |
| 3.3.1 omp31 基因 PCR 扩增结果 | 第53页 |
| 3.3.2 pET28aomp31 重组质粒菌落 PCR 验证 | 第53-54页 |
| 3.3.3 pET28aomp31 重组质粒 PCR 验证 | 第54页 |
| 3.3.4 pET28aomp31 重组质粒双酶切验证 | 第54-55页 |
| 3.3.5 pET28aomp31 重组质粒基因序列测序结果 | 第55页 |
| 3.4 pET28aomp31_(193-227)重组质粒的构建结果 | 第55-57页 |
| 3.4.1 omp31_(193-227)基因表达片段的PCR 扩增结果 | 第55页 |
| 3.4.2 pET28aomp31_(193-227)重组质粒菌落 PCR 验证 | 第55-56页 |
| 3.4.3 pET28aomp31_(193-227)重组质粒 PCR 验证 | 第56页 |
| 3.4.4 pET28aomp31_(193-227)重组质粒双酶切验证 | 第56-57页 |
| 3.4.5 pET28aomp31_(193-227)重组质粒基因序列测序结果 | 第57页 |
| 3.5 pET28abls 重组质粒结果 | 第57-59页 |
| 3.5.1 bls 基因 PCR 扩增结果 | 第57页 |
| 3.5.2 pET28abls 重组质粒菌落 PCR 验证 | 第57-58页 |
| 3.5.3 pET28abls 重组质粒 PCR 验证 | 第58页 |
| 3.5.4 pET28abls 重组质粒双酶切验证 | 第58-59页 |
| 3.5.5 pET28abls 重组质粒基因序列测序结果 | 第59页 |
| 3.6 pET28aomp31_(193-227)bls 重组质粒的构建结果 | 第59-61页 |
| 3.6.1 rbls 基因 PCR 扩增结果 | 第59页 |
| 3.6.2 romp31_(193-227)基因PCR 扩增结果 | 第59-60页 |
| 3.6.3 pET28aomp31_(193-227) bls 重组质粒菌落 PCR 验证 | 第60页 |
| 3.6.4 pET28aomp31_(193-227)bls 重组质粒 PCR 验证 | 第60-61页 |
| 3.6.5 pET28aomp31_(193-227)bls 重组质粒基因序列测序结果 | 第61页 |
| 3.7 重组蛋白 Omp31 的诱导表达及纯化结果 | 第61-62页 |
| 3.8 重组蛋白 BLS 的诱导表达及纯化结果 | 第62页 |
| 3.9 重组融合蛋白 Omp31_(193-227)BLS 的诱导表达及纯化结果 | 第62-63页 |
| 3.10 ELISA 结果 | 第63-67页 |
| 3.10.1 抗原最佳浓度的确定 | 第63-65页 |
| 3.10.2 抗原与血清最佳作用时间的确定 | 第65页 |
| 3.10.3 血清与酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第65-66页 |
| 3.10.4 底物显色液最佳作用时间的确定 | 第66-67页 |
| 3.10.5 最佳封闭温度的确定 | 第67页 |
| 3.11 琼脂糖扩散试验结果 | 第67-68页 |
| 3.12 凝集试验结果 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 在学研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
