| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 梨石细胞的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 梨石细胞与果实品质的关系 | 第10页 |
| 1.1.2 梨石细胞的发育过程 | 第10-11页 |
| 1.2 木质素代谢的进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 木质素的代谢途径 | 第11-13页 |
| 1.2.2 木质素生物合成调控研究 | 第13-14页 |
| 1.3 F5H功能与应用的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 F5H的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 F5H调控S木质素生物合成的研究 | 第15页 |
| 1.3.3 特异性启动子在F5H调控中的应用 | 第15页 |
| 1.3.4 转录因子在F5H调控中的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 小结 | 第16页 |
| 2 引言 | 第16-19页 |
| 2.1 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 2.3 技术路线 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-27页 |
| 3.1 实验材料 | 第19页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第19页 |
| 3.2 仪器和试剂 | 第19-20页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第19页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 3.3 实验方法 | 第20-27页 |
| 3.3.1 砀山酥梨总RNA的提取 | 第20页 |
| 3.3.2 cDNA第一链合成 | 第20-21页 |
| 3.3.3 简并引物设计 | 第21页 |
| 3.3.4 PbF5H中间片段的扩增 | 第21页 |
| 3.3.5 PbF5H的 3'Full RACE反应 | 第21-22页 |
| 3.3.6 PbF5H的 5'Full RACE反应 | 第22-23页 |
| 3.3.7 PbF5H的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 3.3.8 PbF5H的实时荧光定量表达 | 第24页 |
| 3.3.9 砀山酥梨果实石细胞含量的测定 | 第24页 |
| 3.3.10 砀山酥梨果实木质素含量的测定 | 第24-25页 |
| 3.3.11 砀山酥梨果实木质素单体含量的测定 | 第25页 |
| 3.3.12 PbF5H原核表达载体的构建 | 第25页 |
| 3.3.13 PbF5H蛋白的诱导表达与检测 | 第25页 |
| 3.3.14 PbF5H基因真核表达的构建 | 第25-26页 |
| 3.3.15 PbF5H蛋白的亚细胞定位分析 | 第26页 |
| 3.3.16 农杆菌介导的PbF5H转化拟南芥 | 第26页 |
| 3.3.17 转PbF5H拟南芥的筛选 | 第26-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-52页 |
| 4.1 砀山酥梨PbF5H全长cDNA的克隆 | 第27-32页 |
| 4.1.1 砀山酥梨总RNA的提取 | 第27页 |
| 4.1.2 PbF5H中间片段的扩增 | 第27-28页 |
| 4.1.3 PbF5H 3'RACE扩增 | 第28-29页 |
| 4.1.4 PbF5H 5'RACE扩增 | 第29-30页 |
| 4.1.5 PbF5H全长cDNA序列 | 第30-32页 |
| 4.2 PbF5H的生物信息学分析 | 第32-42页 |
| 4.2.1 PBF5H蛋白的氨基酸序列保守性分析 | 第32-34页 |
| 4.2.2 PbF5H蛋白功能结构域分析 | 第34-35页 |
| 4.2.3 PBF5H蛋白的二级结构分析 | 第35页 |
| 4.2.4 PbF5H蛋白的疏水性分析 | 第35-36页 |
| 4.2.5 PbF5H蛋白的跨膜结构分析 | 第36-37页 |
| 4.2.6 PbF5H蛋白的信号肽预测分析 | 第37-38页 |
| 4.2.7 PbF5H蛋白的同源建模 | 第38-39页 |
| 4.2.8 砀山酥梨P450基因家族的系统进化树分析 | 第39-40页 |
| 4.2.9 砀山酥梨PbF5H同源基因的染色体定位分析 | 第40-41页 |
| 4.2.10 PbF5H同源基因的进化树分析 | 第41-42页 |
| 4.3 PbF5H基因的荧光定量表达分析 | 第42-45页 |
| 4.4 不同授粉品种砀山酥梨生理指标的测定 | 第45-47页 |
| 4.4.1 不同授粉品种砀山酥梨果实石细胞含量的测定 | 第45-46页 |
| 4.4.2 不同授粉品种砀山酥梨果实木质素含量的测定 | 第46-47页 |
| 4.4.3 不同发育时期砀山酥梨石细胞中木质素单体组分的测定 | 第47页 |
| 4.5 PbF5H的原核表达分析 | 第47-49页 |
| 4.5.1 PbF5H原核表达载体的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| 4.5.2 PbF5H融合蛋白的诱导表达与分析 | 第48-49页 |
| 4.6 PbF5H的真核表达分析 | 第49-52页 |
| 4.6.1 PbF5H的植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.6.2 PbF5H蛋白的亚细胞定位 | 第50-51页 |
| 4.6.3 拟南芥的遗传转化 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-55页 |
| 5.1 砀山酥梨PbF5H的克隆与生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 5.2 砀山酥梨PbF5H的表达与石细胞发育的关系 | 第53页 |
| 5.3 PbF5H蛋白的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 5.4 通过基因工程调控石细胞发育的可行性探讨 | 第54-55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
| 在读期间发表的论文 | 第63页 |
