FK506产生菌株选育及代谢调控研究
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 FK506简介 | 第11-17页 |
| 1.1.1 FK506结构特征及性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 FK506药用机理及免疫抑制活性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 FK506生物合成及代谢途径 | 第13-15页 |
| 1.1.4 FK506研究现状 | 第15-17页 |
| 1.2 诱变育种 | 第17-18页 |
| 1.2.1 诱变育种及抗性菌株的选育 | 第17页 |
| 1.2.2 定向选育方法 | 第17-18页 |
| 1.3 培养条件对发酵生产的影响 | 第18-21页 |
| 1.3.1 微生物基础代谢 | 第18-19页 |
| 1.3.2 pH对发酵的影响 | 第19页 |
| 1.3.3 碳、氮源对发酵生产的影响 | 第19-20页 |
| 1.3.4 前体物质对发酵生产的影响 | 第20-21页 |
| 1.4 研究意义 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25页 |
| 2.1.5 主要缓冲液配制及溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.1.6 培养基配方 | 第26页 |
| 2.2 培养方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1 分离和斜面培养 | 第26页 |
| 2.2.2 种子培养 | 第26页 |
| 2.2.3 发酵培养 | 第26-27页 |
| 2.2.4 保种方法 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.3.1 发酵液中FK506含量测定 | 第27-28页 |
| 2.3.2 菌体生长量的测定方法 | 第28-29页 |
| 2.3.3 发酵液中总糖的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 发酵液中有机酸含量的测定方法 | 第30-31页 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.3.6 筑波链霉菌DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.7 筑波链霉菌RT-PCR引物设计 | 第32-34页 |
| 2.3.8 筑波链霉菌RNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.9 RNA纯度及浓度测定 | 第34页 |
| 2.3.10 实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第34-36页 |
| 2.3.11 孢子悬液的制备 | 第36页 |
| 2.3.12 发酵培养基中油脂含量的测定 | 第36-37页 |
| 第3章 诱变育种 | 第37-44页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第37页 |
| 3.2.1 菌种 | 第37页 |
| 3.2.2 培养基 | 第37页 |
| 3.2.3 培养方法 | 第37页 |
| 3.2.4 发酵液中FK506含量测定方法 | 第37页 |
| 3.2.5 孢子悬液的制备 | 第37页 |
| 3.3 诱变及筛选方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 诱变方法 | 第37-38页 |
| 3.3.2 定向筛选方法 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果及分析 | 第39-42页 |
| 3.4.1 传统诱变 | 第39-41页 |
| 3.4.2 定向筛选 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-44页 |
| 第4章 添加物对FK506产量的影响 | 第44-57页 |
| 4.1 引言 | 第44-45页 |
| 4.2 材料与方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 菌种 | 第45页 |
| 4.2.2 培养基 | 第45页 |
| 4.2.3 培养方法 | 第45页 |
| 4.2.4 发酵液中FK506含量测定方法 | 第45页 |
| 4.2.5 菌体生长量的测定 | 第45页 |
| 4.2.6 发酵液中总糖的测定 | 第45页 |
| 4.2.7 RNA提取方法 | 第45页 |
| 4.2.8 RT-PCR | 第45页 |
| 4.2.9 引物 | 第45-46页 |
| 4.2.10 发酵培养基中油脂含量的测定 | 第46页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第46-55页 |
| 4.3.1 氨基酸的添加对FK506产量影响 | 第46-51页 |
| 4.3.2 豆油的添加对FK506产量的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 稀土元素的添加对FK506产量的影响 | 第52-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第5章 前体结构类似物对FK506产量的影响 | 第57-70页 |
| 5.1 引言 | 第57-58页 |
| 5.2 材料与方法 | 第58-59页 |
| 5.2.1 菌种 | 第58页 |
| 5.2.2 培养基 | 第58页 |
| 5.2.3 培养方法 | 第58页 |
| 5.2.4 发酵液中FK506含量测定方法 | 第58页 |
| 5.2.5 发酵液中生长量的测定 | 第58页 |
| 5.2.6 发酵液中总糖的测定 | 第58页 |
| 5.2.7 发酵液中有机酸的测定 | 第58页 |
| 5.2.8 RNA提取方法 | 第58页 |
| 5.2.9 基因转录水平测定方法 | 第58-59页 |
| 5.2.10 RT-PCR | 第59页 |
| 5.2.11 引物 | 第59页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第59-68页 |
| 5.3.1 哌啶酸结构类似物对FK506产量影响 | 第59-61页 |
| 5.3.2 DHCHC结构类似物 | 第61-67页 |
| 5.3.3 添加水杨醇后关键基因转录水平的变化 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第6章 结论与展望 | 第70-71页 |
| 6.1 结论 | 第70页 |
| 6.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
