| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 猪链球菌概述 | 第11-12页 |
| 1.2 严谨反应 | 第12-25页 |
| 1.2.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 (p)ppGpp的代谢及调控 | 第13-17页 |
| 1.2.3 (p)ppGpp与转录调控 | 第17-22页 |
| 1.2.4 (p)ppGpp与翻译调控 | 第22页 |
| 1.2.5 (p)ppGpp对细菌生理机能的影响 | 第22-25页 |
| 1.3 RelA与RelQ的关系研究 | 第25-27页 |
| 2 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-44页 |
| 3.1 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 3.2 实验相关试剂 | 第29-32页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第29-30页 |
| 3.2.2 常用培养基和抗生素 | 第30页 |
| 3.2.3 细菌双杂交试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.4 常用缓冲液 | 第31-32页 |
| 3.3 猪链球菌2型双杂交文库的构建 | 第32-40页 |
| 3.3.1 猪链球菌2型基因组的提取 | 第32-33页 |
| 3.3.2 引物的设计与合成 | 第33-37页 |
| 3.3.3 PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| 3.3.4 酶切与连接 | 第38页 |
| 3.3.5 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 3.3.6 连接产物的转化 | 第39页 |
| 3.3.7 菌落PCR初步筛选和测序鉴定 | 第39页 |
| 3.3.8 质粒的小量制备 | 第39-40页 |
| 3.4 猪链球菌2型(p)ppGpp合成酶与核糖体的相互作用 | 第40-41页 |
| 3.4.1 细菌双杂交自激活实验的验证 | 第40页 |
| 3.4.2 RelA、RelQ分别与核糖体亚基双杂交 | 第40页 |
| 3.4.3 RelA中RSD结构域与核糖体亚基双杂交 | 第40-41页 |
| 3.5 猪链球菌2型(p)ppGpp合成酶缺失突变体的构建及表型研究 | 第41-44页 |
| 3.5.1 引物的设计与合成 | 第41页 |
| 3.5.2 relQ上下游同源臂和氯霉素抗性基因的扩增与纯化 | 第41-42页 |
| 3.5.3 PCR产物的酶切、连接与转化 | 第42页 |
| 3.5.4 质粒的小量制备 | 第42页 |
| 3.5.5 缺失突变体重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.5.6 猪链球菌2型SC-19和△relA缺失突变株的电转化 | 第42-43页 |
| 3.5.7 缺失突变菌株的抗性筛选 | 第43页 |
| 3.5.8 缺失突变菌株的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-56页 |
| 4.1 猪链球菌2型双杂交文库的构建 | 第44-45页 |
| 4.2 RelA、RelQ与核糖体亚基的相互作用 | 第45-53页 |
| 4.2.1 RelA、RelQ蛋白结构分析 | 第45-46页 |
| 4.2.2 细菌双杂交自激活实验的验证结果 | 第46-47页 |
| 4.2.3 RelA、RelQ与核糖体的互作结果 | 第47-50页 |
| 4.2.4 RelA中RSD结构域与核糖体互作结果 | 第50-53页 |
| 4.3 猪链球菌2型(p)ppGpp合成酶缺失突变体的构建及表型 | 第53-56页 |
| 4.3.1 自杀性重组质粒pSET4s-△relQ的构建及酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.2 猪链球菌2型△relQ和△relQ△relA缺失突变株单交换的筛选及PCR鉴定 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-60页 |
| 5.1 细菌双杂交方法的优势与缺点 | 第56-57页 |
| 5.2 RelA/RelQ与核糖体亚基互作的蛋白 | 第57页 |
| 5.3 RelA、RelQ以及RSD与核糖体互作蛋白的之间关系 | 第57-59页 |
| 5.4 突变筛选中存在的问题 | 第59-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附表 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
