| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 丝/苏氨酸蛋白激酶(STPK)和磷酸酶(STPP) | 第12-15页 |
| 1.1.1 STPK和STPP的概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 真核生物中的STPK和STPP | 第13-14页 |
| 1.1.3 原核生物中的STPK和STPP | 第14-15页 |
| 1.2 猪链球菌2型的双组份系统 | 第15页 |
| 1.3 猪链球菌2型的ABC转运子系统 | 第15-17页 |
| 1.4 蛋白质相互作用网络 | 第17-20页 |
| 1.4.1 蛋白质相互作用网络的意义 | 第17页 |
| 1.4.2 蛋白质相互作用研究方法 | 第17-18页 |
| 1.4.3 蛋白质相互作用网络的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.4 蛋白质互作的评估 | 第19-20页 |
| 2 目的和意义 | 第20-21页 |
| 3 材料方法 | 第21-42页 |
| 3.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 3.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 3.3 质粒构建培养基、抗生素配制 | 第23-24页 |
| 3.4 细菌双杂交筛选所需培养基、缓冲液配制 | 第24-26页 |
| 3.5 引物的设计和合成 | 第26-36页 |
| 3.6 诱饵质粒及网络蛋白质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.6.1 以SSU05基因组为模板进行基因组扩增 | 第36页 |
| 3.6.2 PCR产物的纯化 | 第36页 |
| 3.6.3 酶切反应及酶切产物的回收 | 第36-37页 |
| 3.6.4 外源片段与载体的连接 | 第37页 |
| 3.6.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 3.6.6 连接产物的转化 | 第37-38页 |
| 3.6.7 质粒的小量提取 | 第38页 |
| 3.6.8 质粒的酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.7 诱饵蛋白质粒与靶蛋白质粒的共转化及选择性培养 | 第38-39页 |
| 3.7.1 诱饵蛋白质粒与靶蛋白质粒的共转化 | 第38-39页 |
| 3.7.2 诱饵蛋白质粒与靶蛋白质粒自激活检测 | 第39页 |
| 3.7.3 诱饵蛋白质粒与靶蛋白质粒选择性培养 | 第39页 |
| 3.8 PCR初步鉴定共转结果 | 第39-40页 |
| 3.9 重组质粒的构建和蛋白的表达和纯化 | 第40-42页 |
| 3.9.1 重组质粒的构建 | 第40页 |
| 3.9.2 pGEX-KG-PknB在大肠杆菌中表达和纯化 | 第40-41页 |
| 3.9.3 pET-28c与宿主蛋白融合蛋白的表达和纯化 | 第41-42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-68页 |
| 4.1 pBT和pTRG载体的分析和改造 | 第42-44页 |
| 4.2 双组分文库的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.1 双组分文库基因的扩增 | 第44页 |
| 4.2.2 双组分文库重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 4.3 ABC转运子文库的构建 | 第45-48页 |
| 4.3.1 ABC转运子文库基因的扩增 | 第45-46页 |
| 4.3.2 ABC转运子文库重组质粒的构建 | 第46-48页 |
| 4.4 STPK互作网络的研究 | 第48-63页 |
| 4.4.1 STPK同源性的比较 | 第48-51页 |
| 4.4.2 STPK诱饵质粒的构建 | 第51-52页 |
| 4.4.3 细菌双杂交筛选STPK与双组分系统的互作 | 第52-53页 |
| 4.4.4 细菌双杂交筛选STPK与ABC转运子的互作 | 第53-56页 |
| 4.4.5 STPK与双组分和ABC转运子系统互作的拓扑图 | 第56-57页 |
| 4.4.6 STPK与双组分系统阳性互作蛋白载体的构建 | 第57-61页 |
| 4.4.7 STPK与双组分系统阳性互作蛋白的表达和纯化 | 第61-63页 |
| 4.5 STPP互作网络的研究 | 第63-68页 |
| 4.5.1 STPP诱饵质粒的构建 | 第63-64页 |
| 4.5.2 细菌双杂交筛选STPP与双组分系统的互作 | 第64-65页 |
| 4.5.3 细菌双杂交筛选STPP与ABC转运子的互作 | 第65-67页 |
| 4.5.4 STPP与双组分和ABC转运子系统互作的拓扑图 | 第67-68页 |
| 5 讨论与结论 | 第68-71页 |
| 5.1 讨论 | 第68-69页 |
| 5.2 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附表 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
