| 第一章 水稻细胞壁降解过程中的多糖变化 | 第8-42页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 生物质能的现状 | 第12页 |
| 1.2 植物细胞壁 | 第12-14页 |
| 1.2.1 细胞壁的类型及组成 | 第12-13页 |
| 1.2.2 细胞壁的结构特点 | 第13-14页 |
| 1.2.3 细胞壁的生物学功能 | 第14页 |
| 1.3 免疫荧光检测细胞壁多糖 | 第14-18页 |
| 1.3.1 多糖抗体的概念及种类 | 第14-15页 |
| 1.3.2 多糖与其抗体的结合原理 | 第15-16页 |
| 1.3.3 细胞壁多糖抗体的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 生物质预处理方法 | 第18-21页 |
| 1.4.1 物理法 | 第19页 |
| 1.4.2 化学法 | 第19-20页 |
| 1.4.3 生物预处理 | 第20-21页 |
| 1.5 生物质酶解 | 第21页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.3.1 石蜡切片制法 | 第23-24页 |
| 2.3.2 免疫标记及显微镜观察 | 第24页 |
| 2.3.3 比色法测定六碳糖、五碳糖及糖醛酸 | 第24-25页 |
| 2.3.4 半纤维素单糖含量测定 | 第25-27页 |
| 3 结果分析 | 第27-40页 |
| 3.1 碱预处理酶解 | 第27-30页 |
| 3.1.1 荧光染色观察碱处理酶解前后的纤维素变化 | 第27页 |
| 3.1.2 免疫荧光观察碱处理酶解前后的半纤维素变化 | 第27-29页 |
| 3.1.3 免疫荧光观察碱处理酶解前后的果胶变化 | 第29-30页 |
| 3.2 酸预处理酶解 | 第30-32页 |
| 3.2.1 荧光染色观察酸处理酶解前后的纤维素变化 | 第30页 |
| 3.2.2 免疫荧光观察酸处理酶解前后的半纤维素变化 | 第30-31页 |
| 3.2.3 免疫荧光观察酸处理酶解前后的果胶变化 | 第31-32页 |
| 3.3 直接酶解 | 第32-35页 |
| 3.3.1 染色观察直接酶解前后的纤维素变化 | 第32-33页 |
| 3.3.2 免疫荧光观察直接酶解前后的半纤维素变化 | 第33-34页 |
| 3.3.3 免疫荧光观察直接酶解前后的果胶变化 | 第34-35页 |
| 3.4 水稻茎秆切片酶解的己糖、戊糖及糖醛酸释放量 | 第35-37页 |
| 3.5 预处理酶解的单糖释放量 | 第37-40页 |
| 4 讨论与展望 | 第40-42页 |
| 4.1 结合化学分析和免疫荧光等方法分析细胞壁之间的联系 | 第40-41页 |
| 4.2 细胞壁多糖表位与免疫荧光检测 | 第41页 |
| 4.3 研究展望 | 第41-42页 |
| 第二章 OsCslF6基因的遗传转化研究 | 第42-77页 |
| 摘要 | 第42-43页 |
| Abstract | 第43-44页 |
| 1 前言 | 第44-53页 |
| 1.1 植物细胞壁中的MLG | 第44页 |
| 1.2 MLG合酶基因的功能基因组学鉴定 | 第44-46页 |
| 1.3 MLG合酶的合成及调控 | 第46-48页 |
| 1.3.1 MLG合酶基因家族 | 第46-47页 |
| 1.3.2 MLG合酶的合成区域 | 第47-48页 |
| 1.3.3 MLG合酶的调控区域 | 第48页 |
| 1.4 细胞壁MLG合酶的生物学功能 | 第48-49页 |
| 1.4.1 MLG合酶参与调控植物细胞机械支撑的网状结构 | 第48-49页 |
| 1.4.2 MLG合酶参与调控细胞壁的扩张 | 第49页 |
| 1.4.3 MLG合酶参与调控磷酸盐的积聚 | 第49页 |
| 1.5 细胞壁MLG的分布及结构特点 | 第49-51页 |
| 1.5.1 MLG的分布特点 | 第49-50页 |
| 1.5.2 MLG的精细结构 | 第50-51页 |
| 1.5.3 MLG的聚合度 | 第51页 |
| 1.6 细胞壁MLG与纤维素之间的联系 | 第51-52页 |
| 1.7 细胞壁MLG在生物能源上的应用前景 | 第52-53页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第53页 |
| 2 实验材料和方法 | 第53-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 2.1.1 水稻材料 | 第53页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第53-54页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第54页 |
| 2.1.4 试剂及配方 | 第54页 |
| 2.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 2.2.1 水稻总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 2.2.2 总RNA中DNA的去除 | 第55页 |
| 2.2.3 第一链cDNA的合成 | 第55页 |
| 2.2.4 反转录产物浓度稀释 | 第55-56页 |
| 2.3 基因OsCslF6超表达载体构建 | 第56-62页 |
| 2.3.1 cDNA扩增 | 第56-57页 |
| 2.3.2 PCR产物回收 | 第57页 |
| 2.3.3 PCR产物与载体进行BP及LR反应 | 第57-58页 |
| 2.3.4 PCR产物与载体酶切 | 第58-59页 |
| 2.3.5 酶切后连接载体 | 第59页 |
| 2.3.6 大肠杆菌DH5α 感受态制备（CaCl_2法） | 第59页 |
| 2.3.7 大肠杆菌DH5α 转化 | 第59-60页 |
| 2.3.8 菌落PCR检测阳性克隆 | 第60页 |
| 2.3.8 大肠杆菌质粒提取 | 第60-61页 |
| 2.3.9 质粒双酶切检测 | 第61页 |
| 2.3.10 测序正确无突变的质粒转农杆菌EHA105 | 第61-62页 |
| 2.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第62-64页 |
| 2.4.1 水稻愈伤诱导 | 第62页 |
| 2.4.2 水稻愈伤继代培养 | 第62页 |
| 2.4.3 预培养 | 第62页 |
| 2.4.4 农杆菌侵染及共培养 | 第62-63页 |
| 2.4.5 选择培养 | 第63页 |
| 2.4.6 分化培养 | 第63页 |
| 2.4.7 分化苗生根 | 第63-64页 |
| 2.4.8 炼苗 | 第64页 |
| 2.5 水稻转基因苗阳性苗鉴定 | 第64-65页 |
| 2.5.1 CTAB法提取水稻的基因组DNA | 第64页 |
| 2.5.2 转基因苗的PCR检测 | 第64-65页 |
| 2.6 水稻转基因苗的蛋白水平的表达 | 第65-67页 |
| 2.6.1 水稻膜蛋白的提取 | 第65页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE | 第65-66页 |
| 2.6.3 Western blot | 第66-67页 |
| 2.7 农杆菌GV3101介导的拟南芥遗传转化 | 第67-68页 |
| 2.7.1 农杆菌的制备 | 第67页 |
| 2.7.2 拟南芥转化及阳性苗筛选 | 第67-68页 |
| 2.8 拟南芥转基因阳性苗RT-PCR | 第68-70页 |
| 2.8.1 提取拟南芥叶片的cDNA | 第68-69页 |
| 2.8.2 目的转录产物检测 | 第69-70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-75页 |
| 3.1 OsCslF6全长cDNA克隆及超表达和互补载体构建 | 第70-72页 |
| 3.2 水稻转基因阳性苗鉴定 | 第72-73页 |
| 3.3 水稻中OsCslF6的基因表达分析 | 第73页 |
| 3.4 转基因水稻OsCslF6蛋白分析 | 第73-74页 |
| 3.5 拟南芥中OsCslF6的基因表达分析 | 第74-75页 |
| 3.6 OsCslF6拟南芥转基因植株的植株观察 | 第75页 |
| 4 讨论与展望 | 第75-77页 |
| 4.1 讨论 | 第75-76页 |
| 4.1.1 OsCslF6基因调控MLG合酶在质膜上的合成 | 第75-76页 |
| 4.1.2 OsCslF6基因参与调控植株的输导组织 | 第76页 |
| 4.2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 附录 | 第86-97页 |
| 附录1 水稻组织的培养基配方 | 第86-90页 |
| 附录2 组织培养主要溶液配方 | 第90-92页 |
| 附录3 其他常用生化试剂 | 第92-93页 |
| 附录4 OsCslF6基因启动子、CDS及引物序列 | 第93-96页 |
| 附录5 标准曲线 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
