| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 论文综述 | 第11-18页 |
| 1.1 北极深海沉积物与微生物资源 | 第11页 |
| 1.2 乙醛脱氢酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 ALDH分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 乙醛脱氢酶的研究现状 | 第12页 |
| 1.2.3 ALDH缺乏症 | 第12-13页 |
| 1.2.4 ALDH与人类健康 | 第13页 |
| 1.2.5 ALDH在临床研究的应用 | 第13页 |
| 1.2.6 ALDH的研究前景 | 第13-14页 |
| 1.3 蛋白表达与分子伴侣 | 第14-18页 |
| 1.3.1 分子伴侣的探索过程 | 第14页 |
| 1.3.2 分子伴侣的特点 | 第14-15页 |
| 1.3.3 分子伴侣的功能 | 第15页 |
| 1.3.4 分子伴侣的类型 | 第15-16页 |
| 1.3.5 分子伴侣与酶的关系 | 第16页 |
| 1.3.6 分子伴侣介导的ccs24-5-a基因的表达 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1 阳性克隆子的来源 | 第18页 |
| 2.2 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.3.1 抗生素 | 第19页 |
| 2.3.2 试剂与试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.3.3 NAD~+溶液的配制及保存 | 第20页 |
| 2.3.4 工具酶与Maker | 第20页 |
| 2.4 主要仪器 | 第20页 |
| 2.5 培养基 | 第20-21页 |
| 2.6 常用溶液 | 第21-22页 |
| 2.7 SDS-PAGE | 第22-24页 |
| 2.7.1 SDS-PAGE电泳仪的使用方法 | 第22页 |
| 2.7.2 SDS-PAGE常用溶液 | 第22-24页 |
| 第三章 实验流程以及方法 | 第24-31页 |
| 引言 | 第24页 |
| 3.1 ccs24-5-a基因序列分析 | 第24页 |
| 3.2 ccs24-5-a基因的亚克隆 | 第24-27页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 3.2.2 PCR扩增目的片段ccs24-5-a | 第25页 |
| 3.2.3 BamH Ⅰ HindⅢ双酶切目的片段 | 第25-26页 |
| 3.2.4 载体pET28a的处理 | 第26页 |
| 3.2.5 ALDH基因的克隆 | 第26页 |
| 3.2.6 一步法感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 3.2.7 转化 | 第26-27页 |
| 3.2.8 阳性克隆的鉴定 | 第27页 |
| 3.3 ALDH的诱导表达 | 第27页 |
| 3.4 分子伴侣协助下的ccs24-5-a基因的表达 | 第27-28页 |
| 3.4.1 共表达系统的构建 | 第27-28页 |
| 3.4.2 共表达 | 第28页 |
| 3.5 ccs24-5-a表达产物的纯化 | 第28-29页 |
| 3.6 ALDH酶活测定 | 第29-30页 |
| 3.6.1 反应体系 | 第29页 |
| 3.6.2 ccs24-5-a表达的ALDH酶活的测定方法 | 第29-30页 |
| 3.7 温度,pH对ALDH酶活性的影响 | 第30-31页 |
| 3.7.1 温度对ALDH酶活性的影响 | 第30页 |
| 3.7.2 pH对ALDH酶活性的影响 | 第30-31页 |
| 第四章 实验结果 | 第31-41页 |
| 4.1 ccs24-5-a基因的生物信息学分析 | 第31-35页 |
| 4.1.1 ccs24-5-a所编码的氨基酸的理化性质 | 第31-33页 |
| 4.1.2 ccs24-5-a编码的蛋白功能区域分析 | 第33-35页 |
| 4.1.3 ccs24-5-a编码的蛋白亲水性/疏水性预测 | 第35页 |
| 4.2 ccs24-5-a基因的亚克隆 | 第35-36页 |
| 4.3 ccs24-5-a基因的原核表达 | 第36-37页 |
| 4.4 分子伴侣协助下的ccs24-5-a基因的表达 | 第37-38页 |
| 4.5 ccs24-5-a基因表达产物的纯化 | 第38-39页 |
| 4.6 温度及pH对酶活的影响 | 第39-40页 |
| 4.7 系统发育树分析 | 第40-41页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第41-45页 |
| 5.1 ccs24-5-a基因生物信息学分析 | 第41页 |
| 5.2 ccs24-5-a基因的蛋白表达 | 第41-43页 |
| 5.2.1 单独表达ccs24-5-a的基因蛋白 | 第41-42页 |
| 5.2.2 分子伴侣协助下目的蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 5.3 蛋白质降解片段的分析 | 第43页 |
| 5.4 ccs24-5-a表达的蛋白活性检测 | 第43页 |
| 5.4.1 最适温度的测定 | 第43页 |
| 5.5 总结 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
