| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 荧光假单胞菌概述 | 第10-11页 |
| 1.2 荧光假单胞菌的特征 | 第11页 |
| 1.3 荧光假单胞菌的流行病学特征 | 第11页 |
| 1.4 荧光假单胞菌对食品的危害 | 第11-12页 |
| 1.5 检测方法概述 | 第12-14页 |
| 1.5.1 传统检测方法 | 第12页 |
| 1.5.2 现代分子生物学检测方法 | 第12-14页 |
| 1.5.2.1 PCR检测方法 | 第13页 |
| 1.5.2.2 多重PCR结合微阵列荧光显色法 | 第13页 |
| 1.5.2.3 荧光定量PCR检测法 | 第13-14页 |
| 1.5.2.4 荧光原位杂交技术 | 第14页 |
| 1.5.2.5 流式细胞术 | 第14页 |
| 1.6 荧光假单胞菌检测中存在的问题和展望 | 第14-16页 |
| 第二章 单重PCR检测靶点的筛选 | 第16-26页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1.1 细菌菌株及载体质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要培养基和试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第19页 |
| 2.1.4 菌株的活化与培养 | 第19-20页 |
| 2.1.5 基因组DNA提取及纯度分析 | 第20-21页 |
| 2.1.6 靶点的定向选择及引物的在线设计 | 第21-22页 |
| 2.1.7 实验过程设计 | 第22-24页 |
| 2.1.7.1 PCR反应体系 | 第22页 |
| 2.1.7.2 PCR反应程序 | 第22页 |
| 2.1.7.3 PCR结果电泳检测 | 第22页 |
| 2.1.7.4 PCR产物纯化 | 第22页 |
| 2.1.7.5 PCR产物与pMD19-T载体连接反应 | 第22-23页 |
| 2.1.7.6 感受态细胞制备 | 第23页 |
| 2.1.7.7 重组质粒的转化 | 第23页 |
| 2.1.7.8 PCR法筛选阳性克隆及转化子的质粒抽提 | 第23-24页 |
| 2.1.7.9 PCR产物纯化测序 | 第24页 |
| 2.2 实验结果 | 第24页 |
| 2.3 结果讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 双重PCR检测体系的建立及评价 | 第26-37页 |
| 3.1 材料与方法 | 第26-32页 |
| 3.1.1 细菌菌株及载体质粒 | 第26-29页 |
| 3.1.2 主要仪器试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.3 引物设计与合成 | 第30页 |
| 3.1.4 双重PCR反应体系及条件优化 | 第30页 |
| 3.1.5 退火温度优化实验 | 第30-31页 |
| 3.1.6 特异性检测 | 第31页 |
| 3.1.7 灵敏度评价 | 第31页 |
| 3.1.8 人工污染实验 | 第31页 |
| 3.1.9 实际食品样品检测 | 第31-32页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第32-36页 |
| 3.2.1 反应体系及条件优化 | 第32-33页 |
| 3.2.2 特异性检测 | 第33页 |
| 3.2.3 灵敏度检测 | 第33-34页 |
| 3.2.4 人工污染实验 | 第34-35页 |
| 3.2.5 实际食品样品检测 | 第35-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 假单胞菌蛋白酶水解活力及耐热性研究 | 第37-46页 |
| 4.1 基于rpo B基因测序对假单胞菌种类进行鉴定 | 第38-40页 |
| 4.1.1 材料与方法 | 第38-40页 |
| 4.1.1.1 细菌菌株 | 第38-39页 |
| 4.1.1.2 仪器与试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.2 PCR反应程序设计 | 第40页 |
| 4.2 假单胞菌金属蛋白酶酶活及耐热性测定 | 第40-42页 |
| 4.2.1 假单胞菌蛋白酶活力定性测定 | 第40-41页 |
| 4.2.1.1 材料与方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1.2 方法 | 第41页 |
| 4.2.2 假单胞菌蛋白酶活力定量测定 | 第41-42页 |
| 4.2.2.1 实验菌种及仪器 | 第41-42页 |
| 4.2.2.2 培养基及培养条件 | 第42页 |
| 4.2.2.3 实验方法 | 第42页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 4.3.1 基于rpo B基因测序对假单胞菌进行种类的鉴定 | 第42-44页 |
| 4.3.2 蛋白酶活力定性测定 | 第44页 |
| 4.3.3 蛋白酶活力大小测定结果 | 第44-45页 |
| 4.3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 总结及展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及专利 | 第54页 |
