| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一章 ZNF545在肝癌细胞系中的表达情况及甲基化状态 | 第16-34页 |
| 1. 材料与试剂 | 第16-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第16页 |
| 1.2 实验耗材 | 第16页 |
| 1.3 实验试剂 | 第16-18页 |
| 1.4 工作液的配置 | 第18-19页 |
| 2. 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.1 细胞的培养与5-AZA药物诱导 | 第19-20页 |
| 2.2 细胞系总RNA的提取 | 第20页 |
| 2.3 cDNA第一条链合成 | 第20-21页 |
| 2.4 逆转录PCR(即RT-PCR) | 第21-22页 |
| 2.5 PCR结果分析 | 第22页 |
| 2.6 细胞DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.7 制备MSP实验的阳性对照-IVD(In Vitro Methylation) | 第23-24页 |
| 2.8 非甲基化阴性对照---正常人外周血中淋巴细胞DNA制备 | 第24页 |
| 2.9 甲基化特异PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP) | 第24-26页 |
| 2.10 硫化测序(Bisulfite genomic sequenceing,BGS) | 第26-29页 |
| 3. 结果 | 第29-32页 |
| 3.1 ZNF545在肝癌细胞系中的表达情况 | 第29页 |
| 3.2 肝癌细胞系中ZNF545基因启动子区的甲基化状态 | 第29-31页 |
| 3.3 去甲基化药物5-AZA可诱导ZNF545的表达 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 5. 小结 | 第33-34页 |
| 第二章 肝癌组织中ZNF545基因的甲基化情况 | 第34-41页 |
| 1. 试剂与材料 | 第34-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 实验耗材 | 第34页 |
| 1.3 实验试剂 | 第34-35页 |
| 1.4 工作液的配置 | 第35页 |
| 1.5 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.1 肝癌组织DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2 甲基化特异性PCR(MSP) | 第37页 |
| 2.3 统计分析 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-40页 |
| 5. 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 ZNF545在肝癌细胞系中的功能研究 | 第41-59页 |
| 1. 材料与试剂 | 第41-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.2 实验耗材 | 第41页 |
| 1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 1.4 实验仪器 | 第42页 |
| 2. 实验方法 | 第42-50页 |
| 2.1 ZNF545表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.2 细胞培养 | 第45页 |
| 2.3 质粒转染 | 第45-46页 |
| 2.4 细胞增殖试验(MTT实验) | 第46页 |
| 2.5 克隆形成实验 | 第46-47页 |
| 2.6 侵袭迁移实验 | 第47-48页 |
| 2.7 细胞周期检测 | 第48页 |
| 2.8 细胞凋亡检测 | 第48页 |
| 2.9 Western-blot实验 | 第48-50页 |
| 3. 结果 | 第50-57页 |
| 3.1 恢复ZNF545表达的验证 | 第50-51页 |
| 3.2 ZNF545可抑制肝癌细胞的增殖能力 | 第51-52页 |
| 3.3 ZNF545可促进肝癌细胞的凋亡 | 第52-55页 |
| 3.4 ZNF545可抑制肝癌细胞的侵袭迁移能力 | 第55-57页 |
| 3. 讨论 | 第57-58页 |
| 4. 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 文献综述 | 第67-78页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
