| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 抗菌肽的概述及其在畜牧业上的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.1 抗菌肽天蚕素B的概述 | 第11页 |
| 1.1.2 抗菌肽在畜牧业中的应用及优势 | 第11-12页 |
| 1.2 蛋氨酸与赖氨酸的概述及其在畜牧上的应用 | 第12-15页 |
| 1.2.1 蛋氨酸与赖氨酸的简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 蛋氨酸与赖氨酸在家禽生产上的研究应用 | 第13页 |
| 1.2.3 高蛋氨酸基因的研究与应用 | 第13-14页 |
| 1.2.4 高赖氨酸基因的研究与应用 | 第14-15页 |
| 1.3 益生菌的概述及应用 | 第15-16页 |
| 1.3.1 益生菌的概念与分类 | 第15页 |
| 1.3.2 益生菌的作用及其在畜牧上的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 纳豆芽孢杆菌的概述及在畜牧业上的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 纳豆芽孢杆菌的简介 | 第16页 |
| 1.4.2 纳豆芽孢杆菌在畜牧业中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 实验目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.2 常用培养基 | 第19页 |
| 2.1.3 主要实验药品 | 第19页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要试剂和缓冲液的配制 | 第20页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及c DNA的获取 | 第21-23页 |
| 2.2.2 克隆载体的构建及鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.3 纳豆芽孢杆菌表达载体的构建及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 重组质粒p HT43/CB在纳豆芽孢杆菌中蛋白的水平表达 | 第26-28页 |
| 2.2.5 重组质粒p HT43/zein-Cflr在纳豆芽孢杆菌中蛋白水平的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.6 HPLC分别检测菌液中蛋氨酸和赖氨酸含量 | 第29-30页 |
| 2.2.7 重组的纳豆芽孢杆菌及野生菌株生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-47页 |
| 3.1 获取目的基因 | 第31-35页 |
| 3.1.1 PCR扩增天蚕素B基因 | 第31页 |
| 3.1.2 高蛋氨酸基因与高赖氨酸基因的扩增 | 第31-35页 |
| 3.2 纳豆芽胞杆菌中重组表达载体的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.1 重组质粒p HT43/CB的构建及验证 | 第35页 |
| 3.2.2 重组质粒p HT43/zein-Cflr的构建及验证 | 第35-36页 |
| 3.3 纳豆芽孢杆菌重组表达载体的转化及稳定性测定 | 第36-40页 |
| 3.3.1 重组载体p HT43/CB的转化及稳定性测定 | 第36-38页 |
| 3.3.2 重组载体p HT43/zein-Cflr的转化及稳定性测定 | 第38-40页 |
| 3.4 纳豆芽孢杆菌中重组表达载体在蛋白水平的表达 | 第40-46页 |
| 3.4.1 纳豆芽孢杆菌表达载体p HT43/CB在蛋白水平的表达 | 第40-41页 |
| 3.4.2 纳豆芽孢杆菌表达载体p HT43/zein-Cflr在蛋白水平的表达 | 第41-46页 |
| 3.5 含表达载体的重组菌及野生菌生长曲线的测定结果 | 第46-47页 |
| 3.5.1 含有p HT43/CB重组菌及野生菌生长曲线的测定结果 | 第46页 |
| 3.5.2 含有p HT43/zein-Cflr重组菌及野生菌生长曲线的测定结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 4.1 目的基因的获取 | 第47-48页 |
| 4.1.1 提取总RNA | 第47页 |
| 4.1.2 PCR获取目的基因 | 第47-48页 |
| 4.2 克隆载体的构建 | 第48页 |
| 4.3 表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.4 纳豆芽孢杆菌感受态制备、转化及稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 4.5 重组载体在纳豆芽孢杆菌中的蛋白水平表达 | 第49-51页 |
| 4.5.1 重组质粒p HT43/CB在纳豆芽孢杆菌中蛋白的水平表达 | 第49页 |
| 4.5.2 重组质粒p HT43/zein-Cflr在纳豆芽孢杆菌中蛋白的水平表达 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
