摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-41页 |
1.1 有害藻华 | 第13-19页 |
1.1.1 成因及危害 | 第13-16页 |
1.1.2 国内外研究进展 | 第16-19页 |
1.2 甲藻 | 第19-34页 |
1.2.1 甲藻的生存策略与生活史 | 第20-23页 |
1.2.2 有关休眠孢囊的研究 | 第23-32页 |
1.2.3 锥状斯氏藻及其休眠孢囊 | 第32-34页 |
1.3 差异表达基因的筛选和抑制性消减杂交方法的选择 | 第34-39页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第39-41页 |
第二章 建立大量获取锥状斯氏藻休眠孢囊的方法 | 第41-55页 |
2.1 实验材料 | 第41-42页 |
2.1.1 藻种 | 第41-42页 |
2.1.2 试剂、仪器 | 第42页 |
2.2 实验方法 | 第42-45页 |
2.2.1 准备细沙 | 第42页 |
2.2.2 培养基配制 | 第42-44页 |
2.2.3 藻种细胞(孢囊)计数 | 第44页 |
2.2.4 藻种与细沙混合、培养 | 第44页 |
2.2.5 休眠孢囊识别、计数 | 第44-45页 |
2.2.6 数据分析 | 第45页 |
2.3 结果 | 第45-50页 |
2.3.1 休眠孢囊观察、鉴别 | 第45-46页 |
2.3.2 休眠孢囊产量和产率统计 | 第46-49页 |
2.3.3 休眠孢囊的收集 | 第49-50页 |
2.4 讨论 | 第50-52页 |
2.5 小结 | 第52-55页 |
第三章 锥状斯氏藻抑制性消减文库的构建和分析 | 第55-95页 |
3.1 实验流程 | 第55-56页 |
3.2 实验材料 | 第56-58页 |
3.2.1 藻细胞 | 第56-57页 |
3.2.2 材料及试剂 | 第57-58页 |
3.3 实验方法 | 第58-74页 |
3.3.1 RNA提取 | 第58-59页 |
3.3.2 DNase I处理 | 第59页 |
3.3.3 cDNA合成 | 第59-60页 |
3.3.4 GAPDH检测反转录效率 | 第60-61页 |
3.3.5 Rsa I酶切 | 第61-62页 |
3.3.6 接头连接 | 第62-63页 |
3.3.7 消减杂交 | 第63-65页 |
3.3.8 差异表达基因的PCR扩增 | 第65-67页 |
3.3.9 消减产物检测 | 第67-68页 |
3.3.10 斑点杂交 | 第68-73页 |
3.3.11 消减序列分析 | 第73-74页 |
3.4 结果 | 第74-93页 |
3.4.1 RNA质量检测 | 第74-76页 |
3.4.2 Rsa Ⅰ酶切结果 | 第76页 |
3.4.3 接头连接效率检测 | 第76-77页 |
3.4.4 消减效率检测 | 第77页 |
3.4.5 消减产物PCR扩增 | 第77-78页 |
3.4.6 菌液PCR检测 | 第78-79页 |
3.4.7 斑点杂交检测 | 第79-80页 |
3.4.8 消减文库生物信息学分析 | 第80-91页 |
3.4.9 剪接前导序列检测 | 第91-93页 |
3.5 讨论 | 第93-94页 |
3.6 小结 | 第94-95页 |
第四章 锥状斯氏藻能量代谢相关基因的表达研究 | 第95-131页 |
4.1 引言 | 第95-97页 |
4.2 对三个被选能量代谢相关基因的介绍 | 第97-103页 |
4.2.1 ATP合成酶β亚基 | 第97-100页 |
4.2.2 细胞色素c氧化酶 | 第100-101页 |
4.2.3 翻译延伸因子 | 第101-103页 |
4.3 实时荧光定量PCR内参基因的筛选 | 第103-111页 |
4.3.1 实验材料 | 第104页 |
4.3.2 实验方法 | 第104-106页 |
4.3.3 结果 | 第106-111页 |
4.3.4 讨论 | 第111页 |
4.4 功能基因(ATP_syntβ、CO1、EF)转录水平分析 | 第111-131页 |
4.4.1 实验材料 | 第111-112页 |
4.4.2 实验方法 | 第112-113页 |
4.4.3 结果 | 第113-126页 |
4.4.4 讨论 | 第126-130页 |
4.4.5 小结 | 第130-131页 |
第五章 结论、创新点与展望 | 第131-133页 |
参考文献 | 第133-149页 |
缩略语中英文对照表 | 第149-151页 |
致谢 | 第151-153页 |
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第153页 |