| 摘要 | 第13-18页 |
| ABSTRACT | 第18-22页 |
| 缩略词 | 第31-33页 |
| 第一章 绪论 | 第33-59页 |
| 1.1 环境、基因与肿瘤的关系 | 第33-45页 |
| 1.1.1 环境污染与肿瘤 | 第35-37页 |
| 1.1.2 抑癌基因p53、INK4a/ARF与肿瘤 | 第37-43页 |
| 1.1.3 环境遗传毒性与抑癌基因的关系 | 第43-45页 |
| 1.2 抗肿瘤药物筛选的现状和发展 | 第45-47页 |
| 1.2.1 体外筛选 | 第45-46页 |
| 1.2.2 体内筛选 | 第46-47页 |
| 1.3 环境遗传毒性检测的现状和发展 | 第47-49页 |
| 1.3.1 Ames法 | 第47-48页 |
| 1.3.2 发光细菌毒性检测法 | 第48-49页 |
| 1.3.3 藻类毒性检测法 | 第49页 |
| 1.4 基于抑癌基因启动子的基因毒性和肿瘤药物筛选系统 | 第49-55页 |
| 1.4.1 真核基因转录调控机理 | 第51-54页 |
| 1.4.2 基于启动子的筛选系统的现状和发展 | 第54-55页 |
| 1.5 黄杨生物碱、升麻提取物与肿瘤 | 第55-56页 |
| 1.6 本研究的主要内容及意义 | 第56-59页 |
| 第二章 抑癌基因启动子的绿色荧光报告载体的构建 | 第59-87页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-62页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第59-60页 |
| 2.1.2 主要试剂和试剂盒 | 第60页 |
| 2.1.3 引物 | 第60-61页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第61-62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-74页 |
| 2.2.1 获取野生型小鼠全基因组DNA | 第62-64页 |
| 2.2.2 p53基因启动子PCR反应体系为: | 第64-65页 |
| 2.2.3 p19基因启动子PCR反应体系为: | 第65-66页 |
| 2.2.4 p16基因启动子PCR反应体系为: | 第66-67页 |
| 2.2.5 GFP报告载体pGL4-GFP的构建 | 第67-70页 |
| 2.2.6 抑癌基因p53启动子GFP报告载体pGL4-p53-GFP的构建 | 第70-71页 |
| 2.2.7 抑癌基因p53启动子GFP报告载体pGL4-p19-GFP的构建 | 第71-73页 |
| 2.2.8 抑癌基因p16启动子GFP报告载体pGL4-p16-GFP的构建 | 第73-74页 |
| 2.3 结果与分析 | 第74-84页 |
| 2.3.1 pGL4-GFP载体的构建 | 第74-79页 |
| 2.3.2 p53、p19~(ARF)、p16~(INK4a)启动子GFP报告载体的构建 | 第79-84页 |
| 2.4 讨论 | 第84-87页 |
| 第三章 环境遗传毒性和抗肿瘤药物体外筛选系统的建立以及天然化合物的体外筛选 | 第87-139页 |
| 3.1 实验材料 | 第87-102页 |
| 3.1.1 实验细胞株 | 第87页 |
| 3.1.2 黄杨生物碱 | 第87-90页 |
| 3.1.3 升麻类提取物 | 第90-99页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第99-100页 |
| 3.1.5 引物 | 第100-101页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第101-102页 |
| 3.2 实验方法 | 第102-116页 |
| 3.2.1 WT、p53-/- MEF细胞的获取 | 第102-104页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第104-105页 |
| 3.2.3 细胞转染 | 第105-106页 |
| 3.2.4 阿霉素和二甲基亚砜处理p53-GFP细胞 | 第106页 |
| 3.2.5 多种基因毒性化合物处理p53-GFP细胞 | 第106-107页 |
| 3.2.6 普洱茶处理p16-GFP细胞 | 第107-108页 |
| 3.2.7 基于p16-GFP细胞的化合物筛选 | 第108页 |
| 3.2.8 KY40细胞增殖实验 | 第108页 |
| 3.2.9 pBABE-ras载体转染p19-GFP细胞 | 第108-109页 |
| 3.2.10 实时荧光定量PCR | 第109-110页 |
| 3.2.11 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第110-115页 |
| 3.2.12 流式细胞仪检测细胞凋亡及周期 | 第115-116页 |
| 3.2.13 统计学处理 | 第116页 |
| 3.3 结果与分析 | 第116-135页 |
| 3.3.1 阿霉素在p53-GFP细胞中有效激活p53启动子 | 第116-118页 |
| 3.3.2 多种基因毒性化合物在p53-GFP细胞中激活启动子转录 | 第118-121页 |
| 3.3.3 基于p53基因启动子的化合物筛选 | 第121-123页 |
| 3.3.4 筛选出的黄杨生物碱化合物对野生型细胞的作用 | 第123-131页 |
| 3.3.5 普洱茶在p16-GFP细胞中激活p16启动子 | 第131-134页 |
| 3.3.6 pBABE-ras载体转染p19-GFP细胞后激活p19启动子 | 第134-135页 |
| 3.4 讨论 | 第135-139页 |
| 第四章 黄杨生物碱KBA07对抑癌基因p53、p19的靶向调控 | 第139-163页 |
| 4.1 实验材料 | 第139-143页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第139页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第139-140页 |
| 4.1.3 引物及序列 | 第140-142页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第142-143页 |
| 4.2 实验方法 | 第143-146页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第143-144页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第144页 |
| 4.2.3 转录因子竞争序列退火 | 第144-145页 |
| 4.2.4 KBA07处理野生型细胞 | 第145页 |
| 4.2.5 KBA07处理多种肿瘤细胞 | 第145页 |
| 4.2.6 细胞周期检测 | 第145-146页 |
| 4.2.7 转录因子预测与竞争实验 | 第146页 |
| 4.3 结果与分析 | 第146-159页 |
| 4.3.1 KBA07对野生型细胞的作用 | 第146-148页 |
| 4.3.2 KBA07对多种肿瘤细胞的作用 | 第148-152页 |
| 4.3.3 KBA07对Hela细胞的作用 | 第152-157页 |
| 4.3.4 KBA07激活p53基因启动子机制研究 | 第157-159页 |
| 4.4 讨论 | 第159-163页 |
| 第五章 总结与展望 | 第163-168页 |
| 5.1 总结 | 第163-167页 |
| 5.2 展望 | 第167-168页 |
| 致谢 | 第168-170页 |
| 参考文献 | 第170-190页 |
| 附录A 攻读博士期间主要成果 | 第190-191页 |
| 一、参与的科研项目 | 第190页 |
| 二、发表论文 | 第190-191页 |
| 三、发明专利 | 第191页 |
