| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 南方水稻黑条矮缩病的发现、分布以及危害 | 第12页 |
| 1.1.2 南方水稻黑条矮缩病的表型症状特点 | 第12-13页 |
| 1.1.3 南方水稻黑条矮缩病的自然寄主和传播介体 | 第13-14页 |
| 1.1.4 SRBSDV的病毒学分类地位 | 第14-15页 |
| 1.1.5 SRBSDV的基因组结构及其功能研究 | 第15-17页 |
| 1.2 植物呼肠孤病毒复制场所—病毒原质的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 植物病毒在介体昆虫体内的侵染循回过程 | 第18-19页 |
| 1.4 原核表达系统的研究概况以及应用 | 第19-20页 |
| 1.5 RNAi的发现以及应用 | 第20-22页 |
| 1.5.1 RNAi的发现 | 第20-21页 |
| 1.5.2 RNAi的原理 | 第21页 |
| 1.5.3 RNAi技术应用 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和方法 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第23页 |
| 2.1.2 水稻病株和介体昆虫白背飞虱 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验主要器材 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 SRBSDV蛋白P5-1抗体的制备 | 第24-33页 |
| 2.2.1.1 引物的设计和合成 | 第24页 |
| 2.2.1.2 感染SRBSDV的水稻总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.1.3 RT-PCR扩增SRBSDV的基因片段P5-1 | 第25-26页 |
| 2.2.1.4 纯化回收扩增的SRBSDVP5-1产物 | 第26-27页 |
| 2.2.1.5 入门载体pDONR221-P5-1的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.1.6 原核表达载体pDEST17-P5-1的构建 | 第29页 |
| 2.2.1.7 原核表达载体pDEST17-P5-1转入Rosetta(DE3)菌株 | 第29页 |
| 2.2.1.8 SRBSDV非结构蛋白P5-1的原核诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.2.1.9 SRBSDV非结构蛋白P5-1抗血清的制备 | 第30页 |
| 2.2.1.10 P5-1抗血清的特异性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.1.11 P5-1抗血清的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.1.12 抗体交联荧光素 | 第32页 |
| 2.2.1.13 P5-1在SRBSDV侵染的白背飞虱体内的分布 | 第32-33页 |
| 2.2.2 源于SRBSDV基因片段的dsRNAs对病毒侵染白背飞虱的影响 | 第33-35页 |
| 2.2.2.1 dsRNA的引物设计和合成 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 微针注射体外合成的dsRNA | 第34页 |
| 2.2.2.3 免疫荧光标记检测dsRNAs处理对SRBSDV在白背飞虱体内侵染的影响 | 第34页 |
| 2.2.2.4 RT-qPCR检测体dsRNAs处理对SRBSDV侵染白背飞虱的影响 | 第34页 |
| 2.2.2.5 Western blot检测dsRNAs处理后SRBSDV编码的相关蛋白在白背飞虱体内表达量的变化 | 第34-35页 |
| 3 结果分析 | 第35-51页 |
| 3.1 SRBSDV非结构蛋白P5-1抗体的制备 | 第35-40页 |
| 3.1.1 RT-PCR扩增目的片段 | 第35-36页 |
| 3.1.2 入门载体pDONR221-P5-1的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.3 原核表达载体pDEST17-P5-1的构建 | 第37页 |
| 3.1.4 原核表达载体pDEST17-P5-1转入Rosetta(DE3)菌株 | 第37-38页 |
| 3.1.5 SRBSDV非结构蛋白P5-1的原核诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.1.6 Western blot检测抗血清的特异性 | 第39页 |
| 3.1.7 P5-1在SRBSDV侵染的白背飞虱体内的分布 | 第39-40页 |
| 3.2 dsRNAs处理对SRBSDV侵染白背飞虱的影响 | 第40-49页 |
| 3.2.1 dsRNA的合成 | 第40页 |
| 3.2.2 dsP5-1处理对病毒相关基因在白背飞虱体内的表达的影响 | 第40-43页 |
| 3.2.3 dsP6处理对病毒相关基因在白背飞虱体内的表达的影响 | 第43-46页 |
| 3.2.4 dsP9-1处理对病毒相关基因在白背飞虱体内的表达的影响 | 第46-49页 |
| 3.3 干扰单个基因表达明显抑制病毒在白背飞虱体内的复制 | 第49-50页 |
| 3.4 dsRNA处理抑制SRBSDV相关基因在蛋白水平上的表达 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
