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鲨鱼TBC1D15蛋白功能的初步研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
缩略语第9-14页
第一章 绪论第14-23页
    1.糖尿病概况及危害第14页
    2. 鲨肝活性肽的研究进展第14-16页
    3. TBC家族的研究进展第16-18页
        3.1 TBC蛋白家族第16-17页
        3.2 TBC1D15 的研究进展第17-18页
    4. microRNA的研究和生物信息学分析第18-19页
        4.1 microRNA的研究第18-19页
        4.2 microRNA的调控作用第19页
    5. 实验方案设计第19-23页
        5.1 实验的目的与意义第19-20页
        5.2 研究的内容第20-22页
        5.3 实验流程图第22-23页
第二章 APSL全蛋白对Rab7 的体外GAP活性分析第23-33页
    1. 材料与试剂第23-26页
        1.1 材料第23页
        1.2 试剂第23-26页
    2. 方法第26-28页
        2.1. CaCl2法制备E. coli BL21 感受态细胞第26页
        2.2 质粒转化第26-27页
        2.3 APSL全蛋白原核表达纯化第27页
        2.4 融合蛋白MBP-Rab7-WT/Q67L/T22N基因的原核表达及产物纯化第27页
        2.5 His-pull down第27-28页
    3. 实验结果第28-32页
        3.1 APSL全蛋白表达纯化第28-29页
        3.2 融合蛋白MBP-Rab7-WT/Q67L/T22N表达纯化第29-30页
        3.3 APSL全蛋白对Rab7 的体外GAP活性分析(His pull down)第30-32页
    4. 讨论第32-33页
第三章 APSL全蛋白体外GAP活性特异性分析第33-40页
    1 材料与试剂第33页
        1.1 材料与试剂第33页
        1.2 主要试剂的配制第33页
        1.3 Rab4/Rab5/Rab8/Rab11 基因的获得第33页
    2 方法第33-35页
        2.1 目的基因和载体质粒双酶切第33-34页
        2.2 目的基因和载体质粒连接反应第34页
        2.3 CaCl2法制备E. coli TG1 感受态细胞第34页
        2.4 连接产物转化第34页
        2.5 重组质粒的提取及鉴定第34页
        2.6 融合蛋白His-sumo-Rab4/Rab5/Rab7-WT/Rab8/Rab11 表达纯化第34-35页
        2.7 Bradford法测蛋白浓度第35页
        2.8 APSL全蛋白与多种Rab蛋白体外GAP活性特异性分析第35页
    3 实验结果第35-39页
        3.1 重组质粒pETduet-His-sumo-Rab4/Rab5/Rab7/Rab8/Rab11 菌液PCR鉴定第35-36页
        3.2 融合蛋白His-sumo-Rab4/Rab5/Rab7/Rab8/Rab11 表达纯化第36-37页
        3.3 APSL全蛋白的Rab-GAP特异性分析第37-39页
    4 讨论第39-40页
第四章 靶定shark TBC1D153’UTR的microRNA筛选及鉴定第40-48页
    1 材料与试剂第40页
    2 方法第40-42页
        2.1 shark TBC1D153’UTR的获得第40页
        2.2 靶定miRNA的筛选第40页
        2.3 截取 200 bp的 3’UTR序列送到公司合成第40-41页
        2.4 双酶切及连接反应第41页
        2.5 连接产物的转化及重组质粒鉴定第41页
        2.6 筛选能靶定到截断UTR的miRNA并合成minics第41页
        2.7 细胞冻存第41页
        2.8 细胞复苏第41-42页
        2.9 质粒的提取第42页
        2.10 细胞转染第42页
        2.11 双荧光素酶报告基因的检测第42页
    3. 实验结果第42-47页
        3.1 筛选靶定到shark TBC1D153’UTR的miRNA第42-44页
        3.2 pUC57-3’UTR载体双酶切第44页
        3.3 3’UTR重组质粒的鉴定第44-45页
        3.4 筛选出靶定 200 bp UTR的miRNA及合成minics第45-46页
        3.5 双荧光素酶报告法验证靶基因 3’UTR的microRNA第46-47页
    4 讨论第47-48页
第五章 融合蛋白shark TBC1D15 制备多克隆抗体第48-54页
    1 材料与试剂第48-49页
        1.1 材料与试剂第48页
        1.2 主要试剂的配制第48-49页
    2 方法第49-50页
        2.1 抗原的制备第49页
        2.2 免疫动物及多抗的制备第49页
        2.3 血清多抗效价的测定第49-50页
        2.4 Western Blotting检测第50页
    3 实验结果第50-52页
        3.1 血清多抗效价检测第50-51页
        3.2 血清多抗Western Blotting检测第51-52页
    4 讨论第52-54页
小结第54-55页
参考文献第55-60页
致谢第60页

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